Fermentų aktyvumą lemiantys veiksniai. Ką reiškia posakis „fermento aktyvumas“?

Fermentų aktyvumo samprata

Kasdienėje biocheminėje praktikoje fermento kiekis praktiškai nevertinamas, o vertinamas tik jo aktyvumas. Veikla yra platesnė sąvoka nei kiekybė. Tai visų pirma reiškia reakcijos rezultatą, būtent substrato praradimą arba produkto susikaupimą. Žinoma, negalima ignoruoti fermento veikimo laiko ir fermento molekulių skaičiaus. Tačiau kadangi dažniausiai neįmanoma apskaičiuoti fermentų molekulių skaičiaus, naudojamas fermento turinčios biologinės medžiagos kiekis (tūris arba masė).

Taigi, nustatant fermento aktyvumą, vienu metu reikia atsižvelgti į tris kintamuosius:

• gauto produkto arba dingusio substrato masė;
• laikas, praleistas reakcijai;
• fermento kiekis, bet iš tikrųjų biologinės medžiagos, kurioje yra fermentas, masė arba tūris.

Norint suprasti šių veiksnių ryšį, aiškus ir paprastas pavyzdys gali būti dviejų pastatų statyba. Pastatus prilyginkime reakcijos produktui, darbuotojai yra fermentai, o komanda tegul atitinka biologinės medžiagos tūrį. Taigi, problemos iš 3 klasės:

1. Vieno pastato statyboje dirbo 10 žmonių komanda, o prie kito panašaus pastato – 5 žmonių komanda. Statybos buvo baigtos vienu metu ir visiškai. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?
2. Vieno 3 aukštų pastato statyboje dirbo 10 žmonių komanda, o kitame 12 aukštų pastate – 10 žmonių komanda. Statybos buvo baigtos vienu metu ir visiškai. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?
3. Statant vieną 5 aukštų pastatą dirbo 10 žmonių komanda, o prie kito panašaus pastato – 10 žmonių komanda. Pirmojo pastato statybos truko 20 dienų, antrojo – per 10 dienų. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?

Fermentų aktyvumo kiekybinio nustatymo pagrindai

1. Fermento aktyvumas išreiškiamas produkto kaupimosi greičiu arba substrato praradimo greičiu, išreikštu medžiagos, kurioje yra fermentas, kiekiu.

Praktikoje jie paprastai naudoja:

• medžiagos kiekio vienetai - molis (ir jo dariniai mmol, µmol), gramas (kg, mg),
• laiko vienetai - minutė, valanda, sekundė,
• masės arba tūrio vienetai – gramas (kg, mg), litras (ml).

Taip pat aktyviai naudojami ir kiti dariniai – katalas (mol/s), tarptautinis aktyvumo vienetas (IU, Unit) atitinka µmol/min.

Taigi fermento aktyvumas gali būti išreikštas, pavyzdžiui, mmol/s×l, g/h×l, IU/l, cat/ml ir kt.

Pavyzdžiui, yra žinoma

2. Standartinių sąlygų sukūrimas, kad būtų galima palyginti skirtingose ​​laboratorijose gautus rezultatus – optimalus pH ir fiksuota temperatūra, pavyzdžiui, 25°C arba 37°C, stebint substrato inkubacijos laiką su fermentu.

Prieš kalbant apie fermentų savybes ir jų priklausomybę nuo bet kokių veiksnių, būtina apibrėžti sąvoką fermentų aktyvumas.

Kasdienėje biocheminėje praktikoje beveik kiekis nėra įvertintas fermentas, bet tik jo aktyvumas. Veikla yra platesnė sąvoka nei kiekybė. Tai visų pirma reiškia reakcijos rezultatas, būtent substrato praradimas arba kaupimasproduktas. Natūralu, kad to negalima ignoruoti laikas, kurį fermentas suveikė ir molekulių skaičius fermentas. Tačiau kadangi dažniausiai neįmanoma apskaičiuoti fermentų molekulių skaičiaus, jie naudoja kiekis biologinė medžiaga, kurioje yra fermento (tūris arba masė).

Taigi, nustatant fermento aktyvumą, vienu metu reikia atsižvelgti į tris veiksnius: kintamieji:

• svorio gautas produktas arba dingęs substratas,
• laikas, išleista reakcijai,
• fermento kiekis, bet iš tikrųjų biologinės medžiagos, kurioje yra fermento, masė arba tūris.

Aiškiai ir paprastai suprasti šių veiksnių ryšį pavyzdys gali aptarnauti dviejų pastatų statybą. Pastatas prilygsta reakcijos produktui, darbininkų– tai fermentai brigada tegul atitinka biologinės medžiagos tūrį. Taigi, problemos iš 3 klasės:

1. Vieno pastato statyboje dirbo 10 žmonių komanda, o prie kito panašaus pastato – 5 žmonių komanda. Statybos buvo baigtos vienu metu ir visiškai. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?

2. Vieno 3 aukštų pastato statyboje dirbo 10 žmonių komanda, o kitame 12 aukštų pastate – 10 žmonių komanda. Statybos buvo baigtos vienu metu ir visiškai. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?

3. Statant vieną 5 aukštų pastatą dirbo 10 žmonių komanda, o prie kito panašaus pastato – 10 žmonių komanda. Pirmojo pastato statybos truko 20 dienų, antrojo – per 10 dienų. Kur didesnis darbuotojų aktyvumas?

Fermentų aktyvumo kiekybinio nustatymo pagrindai

1. Fermentų aktyvumas išreikšta greitis produkto kaupimosi arba substrato praradimo greitis medžiagos kiekis kurių sudėtyje yra fermento.

Praktikoje jie paprastai naudoja:

• medžiagos kiekio vienetai – molis (ir jo dariniai mmol, µmol), gramas (kg, mg),
• laiko vienetai – minutė, valanda, sekundė,
• masės arba tūrio vienetai – gramas (kg, mg), litras (ml).

Taip pat aktyviai naudojami ir kiti dariniai – katalas (mol/s), tarptautinis aktyvumo vienetas (IU, Unit) atitinka µmol/min.

Taigi fermento aktyvumas gali būti išreikštas, pavyzdžiui, mmol/s×l, g/h×l, IU/l, cat/ml ir kt.

Pavyzdžiui, yra žinoma

• kas yra 1 g pepsinas per valandą suskaido 50 kg kiaušinio baltymo – taigi jo aktyvumas bus 50 kg/val. 1 g fermento,
• jei 1,6 ml seilių per valandą suskaido 175 kg krakmolo – aktyvumas seilių amilazė bus 109,4 kg krakmolo per valandą 1 ml seilių arba 1,82 kg/min×g arba 30,3 g krakmolo/s×ml.

2. Kūrimas standartinėmis sąlygomis kad galėtumėte palyginti skirtingose ​​laboratorijose gautus rezultatus – optimalų pH ir fiksuotą temperatūrą, pavyzdžiui, 25°C arba 37°C, stebėdami substrato inkubacijos laiką su fermentu.

Tyrimai, skirti nustatyti MCD fermentinį aktyvumą, remiantis įvairiomis bakterijomis, buvo atlikti keturiais etapais. Tyrimui MKD mėginiai buvo atrinkti remiantis MKD-V monokultūromis (Bifidobacter bifidum longum), MKD-S ( Streptococcus termophilus), MKD-P (Propionobacterium acidi-propionicum), MKD-L (Lactobacillus acidophilus).

Tyrimo tikslas – nustatyti probiotinių mikroorganizmų, įtrauktų į MCD, gebėjimą sintetinti fermentus.

Pirmajame etape pagal GOST 20264.4-89 „Fermentiniai preparatai. Amilolitinio aktyvumo nustatymo metodas“ visuose MCD mėginiuose, bendras amilolizinis aktyvumas nustatytas Ison metodu. Ansono metodas pagrįstas krakmolo hidrolize fermentų amiloliziniu kompleksu iki įvairios molekulinės masės dekstrinų.

Antrame etape pagal GOST 20264.2-88 „Fermentiniai preparatai. Proteolitinio aktyvumo nustatymo metodai“, nustatytas bendras proteolitinis aktyvumas (PA) tirtuose mėginiuose. Metodas pagrįstas natrio kazeinato baltymo hidrolize fermentų kompleksu, kai pH-7,2. Norint nustatyti neutralios proteazės PA 0-10 U/ml, buvo tiriami minimalūs skiedimai. Rūgštinė proteazė nustatyta esant pH-5,5, kai vyksta baltymų hidrolizė.

Trečiajame etape Remiantis TU9291-008-13684916-05, visuose pateiktuose MCD mėginiuose buvo nustatytas bendras celiuliolizinis aktyvumas (CA). Celiulazės nustatymo metodas pagrįstas redukuojančių cukrų nustatymu dėl celiulazės hidrolizės chromatografiniame popieriuje, veikiant fermentui. Šį metodą rekomenduoja IUPAC Tarptautinė biotechnologijų komisija kaip pagrindinį celiuliozės aktyvumo tyrimą. Celiuliozės efektyvumo vienetas laikomas fermento kiekiu, kuris, veikiant chromatografinį popierių esant 50°C ir pH 4,8, gamina 1 mmol redukuojančių cukrų per minutę. Paprastai aktyvumas išreiškiamas vienetais mililitre.

Paskutinis ketvirtasis etapas buvo nustatytas lipazės aktyvumas (LA). Lipazės nustatymo Skerman metodu metodas pagrįstas riebalų rūgščių, susidarančių veikiant lipazei, titravimu šarmu, kaip substratą naudojant alyvuogių aliejų. Lipazei nustatyti buvo naudojamas reakcijos mišinys, susidedantis iš 6,5 ml 1/15 M fosfato-citrato buferio, 2,5 ml alyvuogių aliejaus emulsijos 1% polivinilo alkoholio tirpale santykiu 2:3 ir 1 ml kultūrinio skysčio. filtratas.

MCD tyrimai, pagrįsti įvairiais probiotiniais mikroorganizmais, parodė, kad visuose tirtuose MCD yra viena ar daugiau fermentų grupių (8 lentelė). Taigi MCD-B parodė visų tirtų fermentų grupių buvimą. MKD-R yra trys fermentų grupės: amilolitinis, proteolitinis, celiuliolizinis. MKD-L taip pat turi tris fermentų grupes: proteolitinį, celiulitinį ir lipolitinį, amilolizinė grupė yra silpnai išreikšta. MKD-S turi dvi fermentų grupes: proteolitinį ir celiuliolizinį, silpnai išreikštas amilolizinis ir lipolitinis aktyvumas.

8 lentelė

MKD fermentinis aktyvumas, vnt./ml

Analizuojant duomenis, gautus tiriant MKD fermentinį aktyvumą, galima pastebėti, kad visi tirti MKD pasižymi dideliu celiulazės aktyvumo laipsniu – nuo ​​64,46 (MKD-R) iki 72,4 vnt/ml (MKD-L).

MKD-S ir MKD-B turi vienodą celiulazės aktyvumą – 66,7 vnt./ml.

Visuose mūsų tirtuose MCD yra rūgštinė proteazė, kurioje baltymų hidrolizė vyksta esant pH-5,5. Didžiausias proteazės aktyvumas nustatytas MKD-R – 7,5 vnt/ml, mažiausias – MKD-L (1,0 vnt/ml). MKD-B proteazės aktyvumo reikšmė yra 2,0, MKD-S - 2,5 vnt./ml.

Lipazės aktyvumas nustatytas MKD-L - 1,4 ir MKD-B - 12,6 vnt./ml. Lipazės fermentas nebuvo aptiktas MKD-S ir MKD-R.

Amilolizinis aktyvumas nustatytas MKD-B – 11,2, o MKD-R – 9,4 vnt./ml.

Fig. 1^1 grafiškai pateikia MKD fermentinio aktyvumo reikšmes.

Ryžiai. 1.

Ryžiai. 2.

Ryžiai. 3.

Ryžiai. 4.

MCD fermentinio aktyvumo tyrimo, pagrįsto įvairiomis bakterijomis, rezultatai atitinka literatūros duomenis, kad probiontinės bakterijos pasižymi fermentiniu aktyvumu. Mūsų tyrimai atskleidė pirmaujančias bifidobakterijų fermentines savybes MCD sudėtyje, palyginti su kitais tirtais mikroorganizmais. Įvairios bifidobakterijų padermės, kai kuriais duomenimis, sudaro iki 90% normalios naminių paukščių žarnyno floros. Bifidobakterijos randamos visose žarnyno dalyse.

Jų sintezuojamos fermentų grupės dalyvauja visuose fermentiniuose procesuose, vykstant pašarų maistinių medžiagų konversijai virškinimo trakte. Anot A. I. Khavkin (2003), bifidobakterijos aktyviai dalyvauja fermentinio pašarų virškinimo procesuose, stiprina baltymų hidrolizę, fermentuoja angliavandenius, muilina riebalus, tirpdo skaidulas veikla. Gauti duomenys rodo gaminamų fermentų grupių lygio ir spektro specifiškumą, priklausomai nuo mikroorganizmų priklausomybės tam tikroms rūšims ir gyvenimo sąlygų. Į šiuos duomenis kartu su kitomis charakteristikomis reikėtų atsižvelgti rengiant įvairias rekomendacijas dėl tam tikrų rūšių probiotinių pašarų priedų naudojimo.

Fermentai yra ypatingas baltymų tipas, kuris iš prigimties atlieka įvairių cheminių procesų katalizatorių vaidmenį.

Šis terminas girdimas nuolat, tačiau ne visi supranta, kas yra fermentas ar fermentas, kokias funkcijas ši medžiaga atlieka, taip pat kuo fermentai skiriasi nuo fermentų ir ar jie apskritai skiriasi. Visa tai išsiaiškinsime dabar.

Be šių medžiagų nei žmonės, nei gyvūnai negalėtų virškinti maisto. Ir pirmą kartą žmonija ėmėsi fermentų naudojimo kasdieniame gyvenime daugiau nei prieš 5 tūkstančius metų, kai mūsų protėviai išmoko pieną laikyti „induose“ iš gyvūnų skrandžių. Tokiomis sąlygomis, veikiamas šliužo fermento, pienas virto sūriu. Ir tai tik vienas pavyzdys, kaip fermentas veikia kaip katalizatorius, greitinantis biologinius procesus. Šiandien fermentai yra nepamainomi pramonėje, jie svarbūs gaminant cukrų, margarinus, jogurtus, alų, odą, tekstilę, alkoholį ir net betoną. Šių naudingų medžiagų yra ir plovikliuose bei skalbimo milteliuose – jie padeda pašalinti dėmes esant žemai temperatūrai.

Atradimų istorija

Fermentas išvertus iš graikų kalbos reiškia „raugas“. O žmonija už šios medžiagos atradimą skolinga olandui Janui Baptistui Van Helmontui, gyvenusiam XVI a. Vienu metu jis labai susidomėjo alkoholine fermentacija ir tyrinėdamas rado nežinomą medžiagą, kuri pagreitina šį procesą. Olandas jį pavadino fermentum, o tai reiškia „fermentacija“. Tada, praėjus beveik trims šimtmečiams, prancūzas Louisas Pasteuras, taip pat stebėdamas fermentacijos procesus, padarė išvadą, kad fermentai yra ne kas kita, kaip gyvos ląstelės medžiagos. O po kurio laiko vokietis Eduardas Buchneris iš mielių išgavo fermentą ir nustatė, kad ši medžiaga nėra gyvas organizmas. Jis taip pat davė jam pavadinimą - „zimaza“. Po kelerių metų kitas vokietis Willi Kühne pasiūlė visus baltymų katalizatorius suskirstyti į dvi grupes: fermentus ir fermentus. Be to, jis pasiūlė antrąjį terminą vadinti „rūgu“, kurio veiksmai apima ne tik gyvus organizmus. Ir tik 1897 m. užbaigė visus mokslinius ginčus: buvo nuspręsta abu terminus (fermentas ir fermentas) vartoti kaip absoliučius sinonimus.

Struktūra: tūkstančių aminorūgščių grandinė

Visi fermentai yra baltymai, bet ne visi baltymai yra fermentai. Kaip ir kiti baltymai, fermentai susideda iš. Įdomu tai, kad kiekvienam fermentui sukurti reikia nuo šimto iki milijono aminorūgščių, suvertų kaip perlai ant siūlų. Tačiau šis siūlas niekada nebūna tiesus – dažniausiai jis išlenktas šimtus kartų. Taip sukuriama trimatė struktūra, būdinga kiekvienam fermentui. Tuo tarpu fermento molekulė yra gana didelis darinys, ir tik nedidelė jos struktūros dalis – vadinamasis aktyvusis centras – dalyvauja biocheminėse reakcijose.

Kiekviena aminorūgštis yra sujungta su kita tam tikro tipo cheminiu ryšiu, ir kiekvienas fermentas turi savo unikalią aminorūgščių seką. Daugumai jų sukurti naudojama maždaug 20 rūšių amino medžiagų. Netgi nedideli aminorūgščių sekos pokyčiai gali dramatiškai pakeisti fermento išvaizdą ir „talentus“.

Biocheminės savybės

Nors gamtoje, dalyvaujant fermentams, vyksta daugybė reakcijų, jas visas galima suskirstyti į 6 kategorijas. Atitinkamai, kiekviena iš šių šešių reakcijų vyksta veikiant tam tikro tipo fermentams.

Reakcijos, susijusios su fermentais:

1. Oksidacija ir redukcija.

Šiose reakcijose dalyvaujantys fermentai vadinami oksidoreduktazėmis. Kaip pavyzdį galime prisiminti, kaip alkoholio dehidrogenazės paverčia pirminius alkoholius į aldehidą.

1. Grupės perdavimo reakcija.

Fermentai, skatinantys šias reakcijas, vadinami transferazėmis. Jie turi galimybę perkelti funkcines grupes iš vienos molekulės į kitą. Tai atsitinka, pavyzdžiui, kai alanino aminotransferazės perkelia alfa amino grupes tarp alanino ir aspartato. Transferazės taip pat perkelia fosfatų grupes tarp ATP ir kitų junginių ir sukuria disacharidus iš gliukozės likučių.

1. Hidrolizė.

Reakcijoje dalyvaujančios hidrolazės gali nutraukti pavienius ryšius, pridėdamos vandens elementų.

1. Dvigubos jungties sukūrimas arba pašalinimas.

Šio tipo reakcija vyksta nehidroliziškai, dalyvaujant liazei.

1. Funkcinių grupių izomerizacija.

Daugelio cheminių reakcijų metu funkcinės grupės padėtis molekulėje pasikeičia, tačiau pati molekulė susideda iš tokio pat skaičiaus ir tipų atomų, kaip ir prieš prasidedant reakcijai. Kitaip tariant, substratas ir reakcijos produktas yra izomerai. Tokio tipo transformacija įmanoma veikiant izomerazės fermentams.

1. Vienos jungties susidarymas pašalinus vandens elementą.

Hidrolazės nutraukia ryšį, pridedant vandens elementų į molekulę. Liazės atlieka atvirkštinę reakciją, pašalindamos vandeninę dalį iš funkcinių grupių. Tokiu būdu sukuriamas paprastas ryšys.

Kaip jie veikia organizme

Fermentai pagreitina beveik visas chemines reakcijas, vykstančias ląstelėse. Jie yra gyvybiškai svarbūs žmonėms, gerina virškinimą ir greitina medžiagų apykaitą.

Kai kurios iš šių medžiagų padeda suskaidyti pernelyg dideles molekules į mažesnius „gabalėlius“, kuriuos organizmas gali virškinti. Kiti, priešingai, suriša mažas molekules. Tačiau fermentai, moksliškai kalbant, yra labai selektyvūs. Tai reiškia, kad kiekviena iš šių medžiagų gali pagreitinti tik tam tikrą reakciją. Molekulės, su kuriomis „dirba“ fermentai, vadinamos substratais. Substratai savo ruožtu sukuria ryšį su fermento dalimi, vadinama aktyvia vieta.

Yra du principai, paaiškinantys fermentų ir substratų sąveikos specifiškumą. Vadinamajame „rakto užrakto“ modelyje aktyvus fermento centras užima griežtai apibrėžtą substrato vietą. Pagal kitą modelį abu reakcijos dalyviai – aktyvioji vieta ir substratas – keičia savo formas, kad susijungtų.

Nepriklausomai nuo sąveikos principo, rezultatas visada yra tas pats - fermento veikiama reakcija vyksta daug kartų greičiau. Dėl šios sąveikos „gimsta“ naujos molekulės, kurios vėliau atskiriamos nuo fermento. Ir katalizatoriaus medžiaga toliau atlieka savo darbą, bet dalyvaujant kitoms dalelėms.

Hiper- ir hipoaktyvumas

Būna atvejų, kai fermentai atlieka savo funkcijas netinkamu intensyvumu. Per didelis aktyvumas sukelia pernelyg didelį reakcijos produktų susidarymą ir substrato trūkumą. Rezultatas – sveikatos pablogėjimas ir sunkios ligos. Fermentų hiperaktyvumo priežastis gali būti genetinis sutrikimas arba reakcijoje naudojamų vitaminų ar vitaminų perteklius.

Fermentų nepakankamumas gali sukelti net mirtį, kai, pavyzdžiui, fermentai nepašalina toksinų iš organizmo arba atsiranda ATP trūkumas. Šios būklės priežastis taip pat gali būti genų mutacija arba, atvirkščiai, hipovitaminozė ir kitų maistinių medžiagų trūkumas. Be to, žemesnė kūno temperatūra panašiai lėtina fermentų veiklą.

Katalizatorius ir kt

Šiandien dažnai galima išgirsti apie fermentų naudą. Tačiau kas yra šios medžiagos, nuo kurių priklauso mūsų organizmo veikla?

Fermentai yra biologinės molekulės, kurių gyvavimo ciklas nėra apibrėžtas gimimo ir mirties. Jie tiesiog veikia organizme, kol ištirpsta. Paprastai tai įvyksta veikiant kitiems fermentams.

Biocheminės reakcijos metu jie netampa galutinio produkto dalimi. Kai reakcija baigiasi, fermentas palieka substratą. Po to medžiaga yra paruošta vėl pradėti veikti, bet kitoje molekulėje. Ir tai tęsiasi tol, kol organizmui reikia.

Fermentų išskirtinumas yra tas, kad kiekvienas iš jų atlieka tik vieną priskirtą funkciją. Biologinė reakcija įvyksta tik tada, kai fermentas randa jam tinkamą substratą. Šią sąveiką galima palyginti su rakto ir spynos veikimo principu – tik teisingai parinkti elementai gali „dirbti kartu“. Kitas bruožas: jie gali veikti esant žemai temperatūrai ir vidutiniam pH, o kaip katalizatoriai yra stabilesni nei bet kurios kitos cheminės medžiagos.

Fermentai veikia kaip katalizatoriai, pagreitinantys medžiagų apykaitos procesus ir kitas reakcijas.

Paprastai šie procesai susideda iš specifinių etapų, kurių kiekvienas reikalauja tam tikro fermento darbo. Be to konversijos arba pagreičio ciklas nebus baigtas.

Galbūt geriausiai žinoma iš visų fermentų funkcijų yra katalizatorius. Tai reiškia, kad fermentai sujungia cheminius reagentus taip, kad sumažėtų energijos sąnaudos, reikalingos gaminiui susidaryti greičiau. Be šių medžiagų cheminės reakcijos vyktų šimtus kartų lėčiau. Tačiau fermentų gebėjimai tuo nesibaigia. Visuose gyvuose organizmuose yra energijos, kurios jiems reikia tolesniam gyvenimui. Adenozino trifosfatas arba ATP yra tam tikras įkrautas akumuliatorius, aprūpinantis ląsteles energija. Tačiau ATP funkcionavimas neįmanomas be fermentų. O pagrindinis fermentas, gaminantis ATP, yra sintazė. Kiekvienai gliukozės molekulei, kuri paverčiama energija, sintazė gamina apie 32–34 ATP molekules.

Be to, medicinoje aktyviai naudojami fermentai (lipazė, amilazė, proteazė). Visų pirma, jie yra fermentinių preparatų, tokių kaip Festal, Mezim, Panzinorm, Pancreatin, komponentai, naudojami virškinimo sutrikimams gydyti. Tačiau kai kurie fermentai taip pat gali paveikti kraujotakos sistemą (tirpinti kraujo krešulius) ir pagreitinti pūlingų žaizdų gijimą. Ir net priešvėžinėje terapijoje jie taip pat naudojasi fermentų pagalba.

Fermentų aktyvumą lemiantys veiksniai

Kadangi fermentas daug kartų gali pagreitinti reakcijas, jo aktyvumą lemia vadinamasis apyvartos skaičius. Šis terminas reiškia substrato (reaguojančios medžiagos) molekulių skaičių, kurį 1 fermento molekulė gali transformuoti per 1 minutę. Tačiau yra keletas veiksnių, lemiančių reakcijos greitį:

1. Substrato koncentracija.

Padidinus substrato koncentraciją, reakcija pagreitėja. Kuo daugiau veikliosios medžiagos molekulių, tuo greičiau vyksta reakcija, nes dalyvauja daugiau aktyvių centrų. Tačiau pagreitinti galima tik tol, kol bus panaudotos visos fermentų molekulės. Po to net padidinus substrato koncentraciją reakcija nepagreitins.

1. Temperatūra.

Paprastai temperatūros didinimas pagreitina reakcijas. Ši taisyklė tinka daugeliui fermentinių reakcijų, kol temperatūra nepakyla aukščiau 40 laipsnių Celsijaus. Po šio ženklo reakcijos greitis, priešingai, pradeda smarkiai mažėti. Jei temperatūra nukrenta žemiau kritinės ribos, fermentinių reakcijų greitis vėl padidės. Jei temperatūra ir toliau kyla, kovalentiniai ryšiai nutrūksta ir fermento katalizinis aktyvumas prarandamas visam laikui.

1. Rūgštingumas.

Fermentinių reakcijų greičiui įtakos turi ir pH. Kiekvienas fermentas turi savo optimalų rūgštingumo lygį, kuriam esant reakcija vyksta adekvačiausiai. PH lygio keitimas turi įtakos fermento aktyvumui, taigi ir reakcijos greičiui. Jei pokyčiai yra per dideli, substratas praranda gebėjimą jungtis prie aktyvaus branduolio ir fermentas nebegali katalizuoti reakcijos. Atstačius reikiamą pH lygį, atstatomas ir fermentų aktyvumas.

Žmogaus organizme esantys fermentai gali būti suskirstyti į 2 grupes:

• medžiagų apykaitos;
• virškinimo.

Metabolinis „darbas“ neutralizuoja toksiškas medžiagas, taip pat prisideda prie energijos ir baltymų gamybos. Ir, žinoma, jie pagreitina biocheminius procesus organizme.

Už ką atsakingi virškinimo organai, aišku iš pavadinimo. Tačiau čia taip pat galioja selektyvumo principas: tam tikros rūšies fermentai veikia tik vieną maisto rūšį. Todėl, norėdami pagerinti virškinimą, galite pasinaudoti maža gudrybe. Jei organizmas ką nors iš maisto blogai virškina, tuomet racioną būtina papildyti produktu, kuriame yra fermento, galinčio skaidyti sunkiai virškinamą maistą.

Maisto fermentai yra katalizatoriai, skaidantys maistą iki tokios būsenos, kai organizmas sugeba iš jų pasisavinti naudingas medžiagas. Virškinimo fermentai būna kelių rūšių. Žmogaus organizme įvairiose virškinamojo trakto dalyse randama įvairių rūšių fermentų.

Burnos ertmė

Šiame etape maistas yra veikiamas alfa amilazės. Jis skaido angliavandenius, krakmolą ir gliukozę, esančią bulvėse, vaisiuose, daržovėse ir kituose maisto produktuose.

Skrandis

Čia pepsinas skaido baltymus į peptidus, o želatinazė – želatiną ir mėsoje esantį kolageną.

Kasa

Šiame etape jie „dirba“:

• tripsinas – atsakingas už baltymų skaidymą;
• alfa-chimotripsinas – padeda virškinti baltymus;
• elastazės – skaido kai kurių rūšių baltymus;
• Nukleazės – padeda skaidyti nukleino rūgštis;
• Steapsin – skatina riebaus maisto pasisavinimą;
• amilazė – atsakinga už krakmolo įsisavinimą;
• lipazė – skaido riebalus (lipidus), esančius pieno produktuose, riešutuose, aliejuje ir mėsoje.

Plonoji žarna

Jie „užburia“ maisto daleles:

• peptidazės – skaido peptidinius junginius iki aminorūgščių lygio;
• sacharozė – padeda virškinti sudėtingus cukrus ir krakmolą;
• maltazė – skaido disacharidus į monosacharidus (salyklo cukrų);
• laktazė – skaido laktozę (pieno produktuose randamą gliukozę);
• lipazė – skatina trigliceridų ir riebalų rūgščių pasisavinimą;
• Erepsin – veikia baltymus;
• izomaltazė – „veikia“ su maltoze ir izomaltoze.

Dvitaškis

Čia fermentų funkcijas atlieka:

• Escherichia coli – atsakinga už laktozės virškinimą;
• laktobacilos – veikia laktozę ir kai kuriuos kitus angliavandenius.

Be pirmiau minėtų fermentų, taip pat yra:

• diastazė – virškina augalinį krakmolą;
• invertazė – skaido sacharozę (stalo cukrų);
• gliukoamilazė – krakmolą paverčia gliukoze;
• alfa-galaktozidazė – skatina pupelių, sėklų, sojos produktų, šakniavaisių ir lapinių daržovių virškinimą;
• bromelainas – fermentas, gaunamas iš įvairių baltymų rūšių, skatinantis jų skaidymą, veiksmingas esant skirtingam aplinkos rūgštingumo lygiui, pasižymintis priešuždegiminėmis savybėmis;
• Papainas yra fermentas, išskirtas iš žalios papajos, skatinantis mažų ir didelių baltymų skaidymą ir veiksmingas esant įvairiems substratams ir rūgštims.
• celiuliazė – skaido celiuliozę, augalines skaidulas (žmogaus organizme nerandama);
• endoproteazė – ardo peptidinius ryšius;
• jaučio tulžies ekstraktas – gyvulinės kilmės fermentas, skatinantis žarnyno motoriką;
ir kiti mineralai;
• ksilanazė – skaido gliukozę iš grūdų.

Katalizatoriai gaminiuose

Fermentai yra labai svarbūs sveikatai, nes jie padeda organizmui suskaidyti maisto komponentus į maistines medžiagas. Žarnynas ir kasa gamina daugybę fermentų. Be to, kai kuriuose maisto produktuose taip pat yra daug naudingų medžiagų, skatinančių virškinimą.

Fermentuotas maistas yra beveik idealus naudingų bakterijų, reikalingų tinkamam virškinimui, šaltinis. Ir nors farmaciniai probiotikai „veikia“ tik viršutinėje virškinimo sistemos dalyje ir dažnai nepasiekia žarnyno, fermentinių produktų poveikis jaučiamas visame virškinamajame trakte.

Pavyzdžiui, abrikosuose yra naudingų fermentų mišinio, įskaitant invertazę, kuri yra atsakinga už gliukozės skaidymą ir skatina greitą energijos išsiskyrimą.

Avokadas gali būti natūralus lipazės šaltinis (skatina greitesnį lipidų virškinimą). Organizme šią medžiagą gamina kasa. Tačiau norėdami palengvinti šio organo gyvenimą, galite pasilepinti, pavyzdžiui, salotomis su avokadu – skanu ir sveika.

Be to, kad bananai yra bene geriausiai žinomas kalio šaltinis, jie taip pat aprūpina organizmą amilaze ir maltaze. Amilazės taip pat yra duonoje, bulvėse ir grūduose. Maltazė padeda suskaidyti maltozę, vadinamąjį salyklo cukrų, kurio gausu aluje ir kukurūzų sirupe.

Kitas egzotiškas vaisius, ananasas, turi visą rinkinį fermentų, įskaitant bromelainą. Ir, remiantis kai kuriais tyrimais, jis taip pat turi priešvėžinių ir priešuždegiminių savybių.

Ekstremofilai ir pramonė

Ekstremofilai yra medžiagos, galinčios palaikyti gyvybines funkcijas ekstremaliomis sąlygomis.

Gyvi organizmai, taip pat fermentai, leidžiantys jiems veikti, buvo aptikti geizeriuose, kur temperatūra artima virimo temperatūrai, ir giliai lede, taip pat ekstremalaus druskingumo sąlygomis (Mirties slėnis JAV). Be to, mokslininkai aptiko fermentų, kurių pH lygis, kaip paaiškėjo, taip pat nėra esminis reikalavimas efektyviam veikimui. Tyrėjai ypač susidomėję tiria ekstremofilius fermentus kaip medžiagas, kurios gali būti plačiai naudojamos pramonėje. Nors šiandien fermentai jau buvo naudojami pramonėje kaip biologiškai ir aplinkai nekenksmingos medžiagos. Fermentai naudojami maisto pramonėje, kosmetologijoje, buitinės chemijos gamyboje.

Be to, fermentų „paslaugos“ tokiais atvejais yra pigesnės nei sintetiniai analogai. Be to, natūralios medžiagos yra biologiškai skaidžios, todėl jų naudojimas yra draugiškas aplinkai. Gamtoje yra mikroorganizmų, kurie gali suskaidyti fermentus į atskiras aminorūgštis, kurios vėliau tampa naujos biologinės grandinės komponentais. Bet tai, kaip sakoma, yra visiškai kita istorija.

Fermentai yra biologiniai katalizatoriai, didelės molekulinės baltymų medžiagos, kurias gamina gyva ląstelė. Jie yra griežtai specifiniai ir atlieka gyvybiškai svarbų vaidmenį mikroorganizmų metabolizme. Jų specifiškumas siejamas su aktyviais centrais, suformuotais aminorūgščių grupės, t.y. kiekvienas fermentas reaguoja su konkrečiu cheminiu junginiu arba katalizuoja vieną ar kelias susijusias chemines reakcijas. Pavyzdžiui: fermentas laktazė skaido laktozę, maltazė skaido maltozę ir kt.

Egzofermentai – išskiriami į išorinę sistemą – Endofermentai – medžiagų apykaitos reakcijose iš dalies skaido maistinių medžiagų makromolekules iki paprastesnių junginių, kuriuos gali pasisavinti mikrobų ląstelė (hidrolizės egzofermentai sukelia riebalų, baltymų, angliavandenių hidrolizę).

Mikroorganizmų fermentų sudėtis yra pastovi, o skirtingų tipų mikrobai aiškiai skiriasi fermentų rinkiniu. Todėl fermentinės sudėties tyrimas yra svarbus įvairių mikroorganizmų identifikavimui.

Mikrobų fermentinių savybių praktinis panaudojimas: fermentacijos procesai, grybai alaus ir vyno gamyboje, odų perdirbimas, minkštinimui; konservavimas. Biologinių priedų skalbimo milteliams paruošimas, kad būtų pašalinti baltyminiai teršalai, nes jie baltymus skaido į vandenyje tirpius.

Vitaminai, hormonai ir alkalozės gaunami naudojant fermentus.

ląstelės viduje esančios medžiagos.

ŽIŪRĖTI DAUGIAU:

IN Bakterijų gyvybinėje veikloje fermentai vaidina svarbų vaidmenį, nes jie yra privalomi įvairių biocheminių reakcijų, kurios yra mitybos, kvėpavimo ir reprodukcijos funkcijų pagrindas, dalyviai.

Bakterijų fermentinių sistemų stabilumas leidžia panaudoti jų biochemines savybes kartu su morfologinėmis ir kultūrinėmis savybėmis mikroorganizmų tipams nustatyti.

Fermentams aptikti naudojamos tik grynos mikroorganizmų kultūros, kurios pasėjamos specialiose diferencinės diagnostikos terpėse. Tiriant bakterijų biocheminį aktyvumą, svarbiausią reikšmę turi sacharolitiniai, proteolitiniai ir redokso fermentai.

Mikrobų sacharolitiniai fermentai. Mikroorganizmų sacharolitinį aktyvumą lemia fermentinis polihidroksilių alkoholių ir angliavandenių skaidymas, kai jie pasėjami į diferencinę diagnostinę terpę. Esant optimalioms sąlygoms, skirtingų tipų mikrobai skirtingai elgiasi su tuo pačiu cukrumi, kai kuriuos suardo, o kitų atžvilgiu lieka neutralūs. Ši mikrobų savybė naudojama bakteriologinėje praktikoje, siekiant atskirti skirtingas bakterijų rūšis ir veisles.

Kietose, skystose ir pusiau skystose maistinėse terpėse, kuriose yra įvairių indikatorių (dažniausiai – Andrede indikatorius), veikiant bakterijų sacharolitiniams fermentams, cukrus suskaidomas į aldehidus ir rūgštis. Galutiniai jų skilimo produktai yra anglies dioksidas ir vandenilis. Dėl rūgščių kaupimosi sumažėja maistinės terpės pH, todėl pasikeičia indikatoriaus ir pačios terpės spalva. Jei bakterijos tam tikram angliavandeniui neišskiria fermento, indikatoriaus ir maistinės terpės spalva nekinta. Todėl maistinių terpių rinkinys su indikatoriais vadinamas marga arba spalvota serija.

Norint aptikti sacharolitinius fermentus, tiriama bakterijų kultūra dažniausiai pasėjama spalvotoje terpėje („marga serija“) Hiss (Rec. 15) su angliavandeniais ir Andrede indikatoriumi (Rec. 16) arba BP indikatoriumi (vandeninės mėlynos spalvos mišinys su rozolio rūgštis). Hisso „Motley Row“ paprastai yra penki mėgintuvėliai; su gliukoze, laktoze, manitoliu, maltoze ir sacharoze. Kai kuriais atvejais, norint nuodugniau ištirti mikroorganizmų biochemines savybes, Hisso „marga serija“ papildoma dulcitu, sorbitoliu, ksiloze ir arabinoze. Cukrus, naudojamas sacharolitinių fermentų aptikimui, turi būti chemiškai grynas.

Hiss terpė gali būti skysta arba pusiau skysta (pridedant 0,5 % agaro-agaro). Fermentacijos vamzdelis (plūdė), kuris yra stiklinis vamzdelis, uždarytas viename gale, nuleidžiamas į mėgintuvėlius su skysta maistine terpe. Sterilizacijos metu plūdė visiškai užpildoma maistine terpe. Kai terpėje susidaro dujiniai produktai, jie išstumia skystį iš plūdės ir suformuoja oro varpelį. Pusiau skystose terpėse dujų susidarymą lemia burbuliukų buvimas terpės storyje.

Mikrobų proteolitiniai fermentai. Kai kurie mikroorganizmai gamina ir į išorinę aplinką išskiria proteolitinius fermentus, kurie katalizuoja baltymų skilimą. Dėl baltymo molekulės irimo susidaro didelės molekulinės masės tarpiniai skilimo produktai – peptonai, aminorūgštys ir polipeptidai.

Norint nustatyti proteolitinius fermentus, tiriama mikroorganizmų kultūra pasėjama į maistinę terpę, kurioje yra tam tikras baltymas. Dažniausiai tam naudojama želatina, rečiau – koaguliuotos arklių išrūgos, koaguliuotas kiaušinio baltymas, pienas ar virtos mėsos gabaliukai.

Mikroorganizmų proteolitiniam aktyvumui ant želatinos nustatyti paruošiama mėsos-peptono želatina (17 rec.) ir pilama į mėgintuvėlius 5-6 ml kolonėlėje. Maitinamajai terpei sukietėjus, sėjama injekcijomis, kilpą panardinant giliai į maistinę terpę iki mėgintuvėlio dugno.

Mikrobai, galintys augti žemoje temperatūroje, inkubuojami 20°C-22°C temperatūroje. Likę pasėliai inkubuojami 37°C temperatūroje. 37°C temperatūroje želatina tirpsta, todėl po inkubacijos išimti mėgintuvėliai dedami į šaldytuvą arba šaltą vandenį, kad terpė sukietėtų. Po to, kai terpė sukietėja, jie pradeda matyti mikroorganizmų augimo rezultatus. Kai išsiskiria proteolitinis fermentas želatinazė, baltymai suskaidomi ir maistinė terpė suskystėja, o tai būdinga tam tikroms mikroorganizmų rūšims (37 pav.). Pavyzdžiui, juodligės bacila suskystina želatiną į želatiną piltuvo pavidalu, stafilokokus - kojinės pavidalu, Pseudomonas aeruginosa - sluoksniais ir kt.

FERMENTINĖ MIKROORGANIZMŲ VEIKLA

Įvairios želatinos suskystinimo mikroorganizmais formos

Mikrobų proteolitinio aktyvumo nustatymas Eijkmano pieno agare. Eijkman pieno agaras ruošiamas į 10 ml sterilaus išlydyto maistinių medžiagų agaro įpilant 3 ml lieso pieno ir sumaišant. Eijkmano pieno agaras (rec. 18) pilamas į Petri lėkšteles ir, atvėsus, kilpa arba mentele pasėjamas tiriamu mikroorganizmu, kad gautųsi izoliuotos kolonijos. Po 24-48 valandų inkubavimo termostate proteolitinius fermentus gaminančios kultūros suskaido pieno baltymą – kazeiną, todėl aplink kolonijas susidaro aiškios skaidrios zonos drumstos maistinės terpės fone.

Paskelbimo data: 2015-11-01; Skaityta: 1165 | Puslapio autorių teisių pažeidimas

studopedia.org – Studopedia.Org – 2014–2018 (0,001 s)…

Paskaita Nr. 3. Bakterijų cheminė struktūra, biocheminės savybės ir fermentai.

Ląstelė yra universalus gyvos medžiagos vienetas. Prokariotinių ir eukariotinių ląstelių cheminė sudėtis reikšmingų skirtumų nėra.

Cheminius elementus, sudarančius gyvąją medžiagą, galima suskirstyti į tris pagrindines grupes.

1.Biogeninis cheminiai elementai (C, O, N, H). Jie sudaro 95% sausų likučių, įskaitant. 50 % – C, 20 % – O, 15 % – N, 10 % – H).

2.Makroelementai- P, S, Cl, K, Mg, Ca, Na. Jie sudaro apie 5 proc.

3.Mikroelementai - Fe, Cu, I, Co, Mo ir tt Jie sudaro procentines dalis, tačiau jie yra svarbūs medžiagų apykaitos procesuose.

Cheminiai elementai yra įvairių medžiagų dalis – vanduo, baltymai, lipidai, neutralūs riebalai, angliavandeniai, nukleino rūgštys. Junginių sintezę valdo genai. Bakterijos ląstelė daug medžiagų gali gauti iš išorės – iš aplinkos ar šeimininko organizmo.

Vanduo sudaro nuo 70 iki 90 % biomasės. Vandens kiekis yra didesnis kapsulinėse bakterijose ir mažiausiai sporose.

Voverės randama visuose ląstelės struktūriniuose elementuose. Baltymai gali būti paprastesni (baltymai) arba kompleksiniai (baltymai), grynos formos arba kartu su lipidais ir cukrumi. Yra struktūriniai (struktūrą formuojantys) ir funkciniai (reguliaciniai) baltymai, pastarieji apima fermentus.

Sudėtyje yra baltymų apima ir eukariotams įprastas, ir originalias aminorūgštis - diaminopimelinis, D-alaninas, D-glutaninas,įtrauktas į kai kurių bakterijų peptidoglikanus ir kapsules. Tik ginče dipikolino rūgštis, kuris yra susijęs su dideliu sporų atsparumu. Flagella yra pagaminta iš baltymų flagellina, pasižymintis kontraktilumu ir ryškiomis antigeninėmis savybėmis. Pili (villi) turi specialų baltymą - pilin.

Bacillus genties, maro sukėlėjo, atstovų kapsulės ir daugelio bakterijų, įskaitant stafilokokus ir streptokokus, paviršiaus antigenai turi peptidinį pobūdį. Baltymai A– specifinis S. aureus baltymas – veiksnys, lemiantis nemažai šio patogeno savybių. Baltymai M- specifinis A serogrupės hemolizinių streptokokų baltymas, leidžiantis diferencijuoti serovarus (apie 100), turintis epidemiologinę reikšmę.

Išorinėje gramneigiamų bakterijų membranoje yra daug baltymų, iš kurių 3–4 majoras(didžioji) ir daugiau nei 10 smulkiųjų, atliekančių įvairias funkcijas. Tarp pagrindinių baltymų - porins, formuojasi difuzinės poros, pro kurias į ląstelę gali prasiskverbti mažos hidrofilinės molekulės.

Į sudėtį įeina baltymai peptidoglikanas- biopolimeras, kuris sudaro bakterijų ląstelės sienelės pagrindą. Jį sudaro stuburas (kintamos dviejų aminocukrų molekulės) ir du peptidinių grandinių rinkiniai – šoninė ir skersinė. Dviejų tipų jungtys – glikozidinės (tarp amino cukrų) ir peptidinės, jungiančios peptidoglikano subvienetus, suteikia šiam heteropolimerui jo struktūrą. molekulinis tinklas. Peptidoglikanas yra stabiliausias junginys, sudarantis standžią į maišelį panašią makromolekulę, kuri lemia nuolatinę bakterijų formą ir daugybę jų savybių..

1. Peptidoglikane yra genčiai ir rūšiai būdingų antigenų determinantų.

2. Jis suaktyvina klasikinius ir alternatyvius komplemento sistemos aktyvavimo kelius.

3. Peptidoglikanas slopina fagocitinį aktyvumą ir makrofagų migraciją.

4. Jis gali inicijuoti uždelsto tipo padidėjusio jautrumo (DTH) vystymąsi.

5. Peptidoglikanas turi priešnavikinį poveikį.

6. Pasižymi pirogeniniu poveikiu, t.y. sukelia karščiavimą.

Iš baltymų junginių su nebaltyminiais komponentais svarbiausi yra lipoproteinai, glikoproteinai ir nukleoproteinai.

Nuostabi gyvenimo paslaptis – vyksta baltymų sintezė ribosomos. Yra du pagrindiniai ribosomų tipai – 70S (S-sedimentacijos konstanta, Svedbergo vienetas) ir 80S. 1 tipo ribosomos randamos tik prokariotuose. Antibiotikai neturi įtakos baltymų sintezei 80S tipo ribosomose, paplitusiose eukariotuose.

Lipidai(daugiausia fosfolipidų) yra citoplazminėje membranoje (lipidų dvisluoksnėje), taip pat gramneigiamų bakterijų išorinėje membranoje. Yra mikroorganizmų, kuriuose yra daug lipidų (iki 40 % sausosios medžiagos) – mikobakterijos. Lipiduose yra įvairių riebalų rūgštis, labai specifinis skirtingoms mikroorganizmų grupėms. Jų nustatymas kai kuriais atvejais turi diagnostinę reikšmę, pavyzdžiui, anaerobuose ir mikobakterijose.

Mycobacterium tuberculosis lipiduose yra daug rūgštims atsparių riebalų rūgščių. ftioninis, mikolinis ir tt Didelis lipidų kiekis ir jų sudėtis lemia daugelį Mycobacterium tuberculosis savybių:

Atsparumas rūgštims, šarmams ir alkoholiams;

Sunku dažyti dažais (naudojami specialūs dažymo metodai, dažniausiai pagal Ziehl-Neelsen);

Patogeno atsparumas saulės spinduliams ir dezinfekavimo priemonėms;

- patogeniškumas.

Teicho rūgštys randama gramteigiamų bakterijų ląstelių sienelėse.

Tai vandenyje tirpūs linijiniai polimerai, kuriuose yra glicerolio arba ribolio liekanų, sujungtų fosfodiesterio jungtimis. Pagrindiniai daugelio gramteigiamų bakterijų paviršiaus antigenai yra susiję su teiko rūgštimis.

Angliavandeniai dažniau randama formoje polisacharidai, kuris gali būti egzo- ir endoląstelinis. Iš egzo-ląstelinių polisacharidų išskiriami karkasiniai polisacharidai (kapsulių dalis) ir tikrieji egzopolisacharidai (išėjimas į išorinę aplinką). Tarp bakterinių polisacharidų daugelis yra naudojami medicinoje. Dekstransas- didelės molekulinės masės polisacharidai, savo išvaizda primenantys gleives. 6% tirpalas – kraujo pakaitalas poligliucinas. Dekstrano gelis Sephadex Naudojamas kolonėlės chromatografijoje kaip molekulinis sietas. Endoceliuliniai polisacharidai yra rezervinės ląstelės maistinės medžiagos (krakmolas, glikogenas ir kt.).

Lipopolisacharidas (LPS)– vienas pagrindinių gramneigiamų bakterijų ląstelės sienelės komponentų, tai lipidų ir polisacharidų derinys. LPS susideda iš komplekso:

1.Lipidas A.

2. Tas pats taikoma visoms gramneigiamoms bakterijoms polisacharido šerdis.

3. Terminalinė sacharido grandinė ( O specifinė šoninė grandinė).

Sinonimai: LPS – endotoksinas, O – antigenas.

LPS atlieka dvi pagrindines funkcijas: nustato antigeno specifiškumą ir yra vienas pagrindinių patogeniškumo veiksnių. Tai endotoksinas, kurio toksinės savybės daugiausia pasireiškia sunaikinant bakterijų ląsteles. Jo toksiškumą lemia lipidas A. LPS skatina daugiau nei 20 biologiškai aktyvių medžiagų, lemiančių endotoksemijos patogenezę, sintezę ir turi pirogeninį poveikį.

Nukleino rūgštys- DNR ir RNR. Ribonukleino rūgštys(RNR) randama daugiausia ribosomose (r-RNR - 80-85%), t (transportas) - RNR - 10%, m (šablonas) - RNR - 1-2%, daugiausia viengrandės formos. DNR (dezoksiribonukleino rūgštis) gali būti branduoliniame aparate (chromosomų DNR) arba citoplazmoje specializuotose dariniuose – plazmidėse – plazmidinėje (ekstrachromosominėje) DNR. Mikroorganizmai skiriasi nukleorūgščių struktūra, kiekiu azoto bazės. Genetinį kodą sudaro tik keturios raidės (bazės) – A (adeninas), T (timinas), G (guaninas) ir C (citozinas). Dažniausiai mikroorganizmams apibūdinti kaip taksonominis požymis naudojamas procentinis G/C santykis, kuris skirtingose ​​mikroorganizmų grupėse labai skiriasi.

Mikroorganizmai sintetina įvairius fermentai- specifiniai baltymų katalizatoriai. Rasta bakterijose 6 pagrindinių klasių fermentai.

1. Oksidoreduktazės – katalizuoja redokso reakcijas.

2. Transferazės – vykdo atomų grupių perdavimo reakcijas.

3.Hidrolazės – atlieka įvairių junginių hidrolizinį skaidymą.

4.Liazės - katalizuoja cheminės grupės pašalinimo iš substrato reakcijas nehidroliziniu būdu, susidarant dvigubam ryšiui arba prie dvigubų ryšių pridedant cheminės grupės.

5. Ligazės arba sintetazės – užtikrina dviejų molekulių sujungimą, susietą su ATP molekulėje esančio pirofosfato jungties skilimu arba panašiu trifosfatu.

6.Izomerazės – nustato elementų grupių erdvinį išsidėstymą.

Pagal bakterijų genetinės kontrolės mechanizmus išskiriamos trys fermentų grupės:

— konstitucinis, kurio sintezė vyksta nuolat;

- indukuojamas, kurio sintezę skatina substrato buvimas;

– represinis, kurio sintezę slopina reakcijos produkto perteklius.

Bakteriniai fermentai skirstomi į egzo ir endofermentai. Egzofermentai patenka į išorinę aplinką ir vykdo didelės molekulinės masės organinių junginių skaidymo procesus. Gebėjimas formuoti egzofermentus daugiausia lemia invaziškumas bakterijos – gebėjimas prasiskverbti į gleivinę, jungiamąjį audinį ir kitus audinių barjerus.

Pavyzdžiai: hialuronidazė skaido hialurono rūgštį, kuri yra tarpląstelinės medžiagos dalis, kuri didina audinių pralaidumą (klostridijos, streptokokai, stafilokokai ir daugelis kitų mikroorganizmų); neuraminidazės palengvina gleivių sluoksnio įveikimą, prasiskverbimą į ląsteles ir plitimą tarpląstelinėje erdvėje (Vibrio cholera, difterijos bacila, gripo virusas ir daugelis kitų). Šiai grupei taip pat priklauso fermentai, skaidantys antibiotikus.

Bakteriologijoje mikroorganizmams diferencijuoti pagal biochemines savybes dažnai svarbiausi yra galutiniai fermentų veikimo produktai ir rezultatai. Pagal tai yra mikrobiologinė (darbinė) fermentų klasifikacija.

1.Sacharolitinis.

2. Proteolitinis.

3.Autolitinis.

4. Oksidacija-redukcija.

5. Patogeniškumo (virulentiškumo) fermentai.

Ląstelės fermentų sudėtį lemia genomas ir tai yra gana pastovi savybė. Mikroorganizmų biocheminių savybių išmanymas leidžia juos atpažinti pagal fermentų rinkinį. Pagrindiniai angliavandenių ir baltymų fermentacijos produktai yra rūgštis, dujos, indolas, vandenilio sulfidas, nors realus įvairių mikroorganizmų spektras yra daug platesnis.

Pagrindiniai virulentiškumo fermentai yra hialuronidazė, plazmakoagulazė, lecitinazė, neuraminidazė, DNRazė. Patogeniškumo fermentų nustatymas yra svarbus nustatant daugybę mikroorganizmų ir nustatant jų vaidmenį patologijoje.

Nemažai mikrobų fermentų plačiai naudojami medicinoje ir biologijoje įvairioms medžiagoms gaminti (autolitinėms, proteolitinėms) ir genų inžinerijoje (restrikcijos fermentai, ligazės).

Ankstesnis12345678910111213141516Kitas

ŽIŪRĖTI DAUGIAU:

Bakteriniai fermentai. Fermentų aktyvumas

Bakteriniai fermentai Fermentai yra labai specifiniai biologiniai katalizatoriai, be kurių neįmanoma gyvybė ir dauginimasis. Daugybė reakcijų, vykstančių bakterinės ląstelės gyvavimo metu, rodo, kad bakterijose yra daug fermentų. Fermentai yra didelės molekulinės masės baltyminės medžiagos. Kai kurie iš jų yra baltymai, kiti yra sudėtingi baltymai. Jie yra pagaminti iš dviejų baltymų dalių ir nebaltyminės dalies, vadinamos protezų grupe. Jame gali būti vitaminų. nukleotidų, geležies atomų ir kt. Ryšys tarp baltyminės fermento dalies ir protezinės grupės gali būti stiprus arba trapus. Jei tirpaluose yra silpnas ryšys, vyksta fermento disociacija ir gali išsilaisvinti laisva protezinė grupė.
Lengvai atsiskiriančios irostetinės fermentų grupės vadinamos kofermentais. Fermentai paprastai skirstomi į šias pagrindines grupes:

1. Oksidoreduktazės. visi fermentai, katalizuojantys redokso reakcijas.
2. Pervedimai. katalizuojantis tam tikrų grupių (pavyzdžiui, amino grupių, fosfatų liekanų ir kt.) perdavimą.
3.

Bakterijų fermentinio aktyvumo tyrimo metodai.

Hidrolazės, kurios hidrolizės būdu skaido GT ar kitus junginius; Šiai klasei taip pat priklauso fosfatazės ir deampnazė – fermentai, kurie atitinkamai hidrolitiškai pašalina fosfato arba amonio grupes iš įvairių organinių junginių.
4. Liazės, fermentai, kurie nehidroliziniu būdu atskiria tam tikras grupes nuo substratų (pavyzdžiui, CO2, HgO, SH2 ir kt.).
5. Izomerazės, kurios katalizuoja tarpmolekulinius persitvarkymus substrate.
6. Ligazės (sintetazės) – fermentų klasė, kuri katalizuoja dviejų molekulių susiliejimą viena su kita, tuo pačiu metu nutraukiant pprofosfato ryšį trifosfatuose (pavyzdžiui, formuojant C-O, C-N arba C-S ryšius).

Saprofitai pasižymi didžiausiu fermentiniu aktyvumu; mažiau ši savybė pasireiškia patogeninėse bakterijose. Patogeninių bakterijų fermentų tyrimas yra nepaprastai svarbus, nes remiantis mikrobų fermentinio aktyvumo nustatymu galima atskirti skirtingus tipus ir nustatyti konkretaus patogeno pobūdį. Be to, mikrobų fermentinis aktyvumas lemia infekcinės ligos patogenezę ir klinikinį vaizdą.
Fermentai skirstomi į exo ir endofermentus. Egzofermentus ląstelė išskiria į išorinę aplinką ir vykdo didelės molekulinės masės organinių junginių skaidymo į paprastesnius, prieinamus asimiliacijai, procesus.
Bakteriniai fermentai skirstomi į konstitucinius ir indukuojamus. Pirmajai grupei priklauso tie fermentai, kuriuos sintetina bakterijos ląstelė, nepriklausomai nuo terpės, kurioje bakterija auginama. Indukuojamus fermentus ši bakterija gamina tik reaguodama į specifinio induktoriaus, esančio terpėje, veikimą.

Visos metabolinės reakcijos bakterijų ląstelėje yra pagrįstos fermentų, priklausančių 6 klasėms: oksireduktazės, transferazės, hidrolazės, ligazės, liazės, izomerazės, aktyvumu. Bakterijos ląstelės gaminami fermentai gali būti lokalizuoti tiek ląstelės viduje – endofermentai, tiek išleisti į aplinką – egzofermentai. Egzofermentai atlieka svarbų vaidmenį aprūpindami bakterijų ląsteles anglies ir energijos šaltiniais, galinčiais prasiskverbti. Dauguma hidrolazių yra egzofermentai, kurie, patekę į aplinką, suskaido dideles peptidų, polisacharidų ir lipidų molekules į monomerus ir dimerus, kurie gali prasiskverbti į ląstelės vidų. Daugelis egzofermentų, pavyzdžiui, hialuronidazė, kolagenazė ir kiti, yra agresijos fermentai. Kai kurie fermentai yra lokalizuoti bakterinės ląstelės periplazminėje erdvėje. Jie dalyvauja medžiagų pernešimo į bakterijų ląstelę procesuose. Fermentinis spektras yra taksonominis požymis, būdingas šeimai, genčiai ir, kai kuriais atvejais, rūšiai. Todėl bakterijų taksonominei padėčiai nustatyti naudojamas fermentinio aktyvumo spektro nustatymas. Egzofermentų buvimą galima nustatyti naudojant diferencinę diagnostinę terpę, todėl bakterijoms identifikuoti buvo sukurtos specialios tyrimo sistemos, susidedančios iš diferencinės diagnostikos terpių.

Bakterijų identifikavimas pagal fermentinį aktyvumą

Dažniausiai hidrolazių ir oksidoreduktazių klasės fermentai nustatomi specialiais metodais ir terpėmis.

Proteolitiniam aktyvumui nustatyti mikroorganizmai inokuliuojami į želatinos kolonėlę. Po 3-5 dienų pasėliai tiriami ir pažymimas želatinos suskystėjimo pobūdis. Kai kurioms bakterijoms skaidant baltymus gali išsiskirti specifiniai produktai – indolas, sieros vandenilis, amoniakas. Joms nustatyti naudojami specialūs indikatoriniai popieriai, kurie tarp kaklelio ir vatos kamštelio įdedami į mėgintuvėlį su MPB ir/ar peptoniniu vandeniu, užkrėstu tiriamais mikroorganizmais. Indolas (triptofano skilimo produktas) sočiame oksalo rūgšties tirpale pamirkytą popieriaus juostelę paverčia rausva spalva. Švino acetato tirpalu impregnuotas popierius, esant vandenilio sulfidui, pajuoduoja. Amoniakui nustatyti naudojamas raudonas lakmuso popierius.

Daugeliui mikroorganizmų taksonominė charakteristika yra gebėjimas skaidyti tam tikrus angliavandenius, susidarant rūgštims ir dujiniams produktams. Tam nustatyti naudojamos Hiss terpės, kuriose yra įvairių angliavandenių (gliukozės, sacharozės, maltozės, laktozės ir kt.). Rūgščių aptikimui į terpę dedamas Andrede reagentas, kuris pH intervale 7,2-6,5 keičia spalvą nuo šviesiai geltonos iki raudonos, todėl Hiss terpės rinkinys su mikroorganizmų augimu vadinamas „marga eile“.

Dujų susidarymui nustatyti plūdės nuleidžiamos į skystą terpę arba naudojamos pusiau skystos terpės su 0,5 % agaro.

Norint nustatyti mišriai fermentacijai būdingą intensyvų rūgščių susidarymą, metilo raudonumo indikatorius, kuris yra geltonas, kai pH 4,5 ir didesnis, ir raudonas, kai pH vertės mažesnės.

Karbamido hidrolizę lemia amoniako (lakmuso popieriaus) išsiskyrimas ir terpės šarminimas.

Identifikuojant daugelį mikroorganizmų, naudojama Voges-Proskauer reakcija į acetoiną – tarpinį junginį formuojant butandiolį iš piruvinės rūgšties. Teigiama reakcija rodo butandiolio fermentaciją.

Katalazę galima aptikti pagal deguonies burbulus, kurie pradeda išsiskirti iš karto sumaišius mikrobų ląsteles su 1% vandenilio peroksido tirpalu.

Norint nustatyti citochromo oksidazę, naudojami šie reagentai:

1) 1% s-naftolio-1 alkoholio tirpalas;

2) 1% vandeninis N-dimetil-p-fenilendiamino dihidrochlorido tirpalas.

Citochromo oksidazės buvimas vertinamas pagal mėlyną spalvą, kuri atsiranda po 2–5 minučių.

Nitritams nustatyti naudojamas Grieso reagentas: raudonos spalvos atsiradimas rodo, kad yra nitritų.

Fermentinės bakterijų savybės

Norint nustatyti sacharolitines angliavandenių savybes, dažniausiai naudojama laktozė, gliukozė, maltozė, sacharozė ir manitolis. Reakcijos rezultatas nustatomas naudojant įvairius į maistinę terpę pridedamus indikatorius, suteikiančius spalvų reakcijas. Todėl sėjos ant diferencinės diagnostikos terpės būdas vadinamas sėjimu į margą eilę. Kartais į vadinamąją ilgąją margą eilę dedama arabinozės, ksilozės, galaktozės, inulino, krakmolo ir kt.

Angliavandeniams skylant susidaro organinės rūgštys (pieno, acto, skruzdžių) ir dujos (CO2 ir H2). Rūgštys sukelia terpės pH pasikeitimą, dėl kurio pasikeičia jos spalva dėl indikatoriaus reakcijos. Susidariusios dujos išstumia skystį viršutinėje plūdės dalyje (naudojant skystą margą seriją) arba sukelia agaro plyšimą (kai naudojamas pusiau skystas cukrus).

Sacharolitinių savybių nustatymo terpė

Šnypšti žiniasklaida susideda iš peptono vandens, 1% angliavandenių ir Andrede indikatoriaus (rūgšties fuksino, pakitusios spalvos šarmu). Į terpę nuleidžiama plūdė, kuri sterilizacijos metu užpildoma terpe. Kai cukrų fermentuoja bakterijos, terpės spalva pasikeičia į raudoną ir plūdėje kaupiasi dujos.

Pusiau skysti cukrūs susideda iš 0,7 % mėsos peptono agaro, 1 % cukraus ir pH indikatoriaus (vandens mėlynos spalvos dažų ir rozolio rūgšties). Sėjama injekcijomis. Fermentuojant cukrui, terpės spalva tampa mėlyna, jei sėjant susidaro dujos, matomi dujų burbuliukai, plyšta pats agaras. Laboratorinėje praktikoje taip pat plačiai naudojamos kitos diferencinės diagnostikos terpės, kuriose yra cukrų.

Proteolitinės savybės bakterijos (baltymų skilimas) nustatomi aptikimo būdu galutiniai baltymų fermentacijos produktai(indolas, vandenilio sulfidas, amoniakas) ir gebėjimas suskystinti želatiną (mėsos peptono sultinys su 10-15% želatinos).

Suskystinti želatiną mikrobai, išskiriantys fermentą, pvz kolagenazės. Skystinimo procesas vyksta iš viršaus, o skirtingų tipų mikrobai suteikia jiems būdingą formą, todėl ši savybė naudojama ir bakterijoms identifikuoti.

Baltymų fermentacijos galutiniais skilimo produktais nustatymas atliekamas sėjant ant mėsos-peptono sultinio arba peptono vandens.

Taigi, atlikdami grynosios kultūros išskyrimo darbus, turime duomenų apie išskirtų bakterijų kultūrų morfologines, tinktūrines, kultūrines ir biochemines savybes. Tai suteikia pagrindą pereiti prie rūšių identifikavimo – pagrindinio paskutinio bakteriologinio tyrimo etapo uždavinio. Šiuo tikslu naudojamas Bergi determinantas. Tai informacinis leidinys, bakterijų katalogas. Joje visi mikroorganizmai sugrupuoti pagal pagrindines biologines savybes. Palyginus pasirinktų kultūrų savybes su nurodytomis determinante, jie nustato jų priklausymą grupei, šeimai, genčiai ir galiausiai rūšiai.

Remiantis morfologija, kvėpavimo tipu, tinktūrinėmis savybėmis ir gebėjimu formuoti sporas, nustatytai kultūrai randama taksonominė grupė. Pagal visas morfologines, tinktūrines savybes, kvėpavimo tipą, sporuliaciją, kultūrines savybes ir kai kurias biochemines ypatybes randama šeima pagal metodinius požymius (kapsulių, žiogelių buvimas ir kt.), kultūrines ir biochemines savybes, nustatoma gentis; , ir vidinis Kiekvieną gentį lemia jos biocheminės ir antigeninės savybės.

Savarankiškas mokinio darbas

Per praktinę pamoką

Kontroliniai klausimai

1. Bakterijų mityba: autotrofai ir heterotrofai.

2. Maistinių terpių klasifikacija.

3. Mikrobų auginimo sąlygos.

4. Reikalavimai maistinėms terpėms.

5. Mikrobų cheminė sudėtis.

6. Grynosios kultūros ir kolonijų samprata.

7. Grynųjų aerobinių mikrobų kultūrų išskyrimo metodai.

8. Grynosios aerobinių bakterijų kultūros išskyrimo etapai.

9. Bakterijų kultūrinės savybės.

10. Biologinė oksidacija aerobinėse ir anaerobinėse bakterijose.

11. Anaerobų auginimo metodai.

12. Grynųjų anaerobų kultūrų išskyrimo metodai.

13. Fermentų reikšmė identifikuojant bakterijas.

Tema: „Aplinkos veiksnių įtaka mikroorganizmams. Fizinių ir cheminių veiksnių veikimas. Sterilizacija ir dezinfekcija"

Tikslas:

– išmokti laboratorinių stiklinių indų sterilizavimo metodus ir

maistinės terpės

Užduotys:

– mokėti teisingai pasirinkti tinkamą sterilizavimo būdą

įvairūs daiktai (aplinka, indai, įrankiai ir kt.);

– įsisavinti pagrindines dezinfekantų grupes ir mechanizmą

jų poveikis bakterijoms.

Išorinėje aplinkoje mikrobus veikia fiziniai, cheminiai ir biologiniai veiksniai, kurie slopina arba skatina jų gyvybinę veiklą.

KAM fiziniai veiksniai apima: aukštą ir žemą temperatūrą, džiovinimą, spinduliavimo energiją, ultragarsą, aukštą slėgį.

Temperatūra. Bet kurio mikroorganizmo fiziologinis aktyvumas yra pritaikytas tam tikram temperatūros optimalumui. Temperatūros atžvilgiu visi mikroorganizmai skirstomi į psichofilai(nuo 0 iki +10°С), mezofilai(nuo +20°С iki +40°С) ir termofilai(+50°С – +70°С). Dauguma patogeninių mikroorganizmų yra mezofilai.

Dauguma mikroorganizmų yra atsparūs žemai temperatūrai (išimtis yra gonokokai ir meningokokai).

Fermentinis bakterijų aktyvumas

Aukšta temperatūra (+50°С – +60°С) neigiamai veikia vegetatyvines bakterijų formas. Sporos gali atlaikyti virimą iki 2 valandų. Destruktyvus aukštos temperatūros poveikis yra sterilizavimo metodų pagrindas.

Pagrindinės kovos su epidemija priemonės

Laboratorijoje

Sterilizacija

Sterilizacija – tai visų gyvų mikroorganizmų (vegetatyvinių ir sporinių formų) pašalinimas arba sunaikinimas objektų viduje arba ant jų paviršiaus.

Sterilizacija atliekama įvairiais būdais: fiziniu, cheminiu, mechaniniu.

Pagrindiniai sterilizavimo proceso reikalavimai atsispindi pramonės standarte 42-21-2-82 „Medicinos prietaisų sterilizavimas ir dezinfekavimas. Metodai, priemonės, režimai“.

Fiziniai metodai

Dažniausias sterilizavimo būdas yra aukšta temperatūra. Kai temperatūra artėja prie 100 °C, dauguma patogeninių bakterijų ir virusų miršta. Dirvožemio termofilinių bakterijų sporos žūva, kai verdamos 8,5 valandos. Mikroorganizmai, įstrigę giliuose žemės sluoksniuose arba padengti krešėjusiu krauju, yra apsaugoti nuo aukštų temperatūrų ir išsaugo savo gyvybingumą.

Sterilizuojant fiziniais metodais, naudojama aukšta temperatūra, slėgis, ultravioletinis švitinimas ir kt.

Paprasčiausias, bet patikimiausias sterilizavimo būdas — kalcinavimas. Jis naudojamas nedegių ir karščiui atsparių objektų paviršiniam sterilizavimui prieš pat jų naudojimą.

Kitas paprastas ir lengvai prieinamas sterilizavimo būdas yra verdantis. Šis procesas atliekamas sterilizatoriuje – stačiakampėje metalinėje dėžutėje su dviem rankenomis ir sandariai priglundančiu dangčiu. Viduje yra išimamas metalinis tinklelis su rankenėlėmis šonuose, ant kurio uždedamas sterilizuojamas instrumentas. Pagrindinis metodo trūkumas yra tai, kad jis nesunaikina sporų, o tik vegetatyvines formas.

Sterilizuojant garais būtina įvykdyti tam tikras sąlygas, kurios garantuoja jos efektyvumą ir produktų sterilumo išsaugojimą tam tikrą laikotarpį. Visų pirma, instrumentai, chirurginiai skalbiniai, tvarsčiai turi būti sterilizuojami pakuotėse. Tam naudojamos: sterilizacinės dėžės (dėžutės), dviguba minkšta pakuotė iš kaliuko, pergamento, drėgmei atsparaus popieriaus (kraftpopieriaus), didelio tankio polietileno.

Privalomas pakuotės reikalavimas yra sandarumas. Sterilumo išlaikymo laikotarpis priklauso nuo pakuotės tipo ir yra trys dienos gaminiams, sterilizuotiems dėžutėse be filtrų, dviguboje minkštoje pakuotėje, pagamintoje iš kalio, vandeniui atsparių popierinių maišelių. Sterilizavimo dėžėse su filtrais produktų sterilumas išlaikomas ištisus metus.

Sausa karščio sterilizacija

Sauso karščio sterilizavimo procesas atliekamas sauso karščio krosnyje (Pastero krosnyje ir pan.) – metalinėje spintelėje su dvigubomis sienelėmis. Spintelės korpuse yra darbo kamera, kurioje yra lentynos, skirtos apdirbamiems daiktams sudėti, ir kaitinimo elementai, skirti tolygiai šildyti orą darbo kameroje.

Sterilizacijos režimai:

temperatūra 150 °C – 2 val.;

temperatūra 160 °C – 170 °C – 45 minutės – 1 valanda;

temperatūra 180 °C – 30 min.;

temperatūra 200 °C – 10-15 min.

Reikia atsiminti, kad esant 160°C temperatūrai popierius ir vata aukštesnėje temperatūroje pagelsta – dega (karbonizuojasi). Sterilizacijos pradžia yra momentas, kai temperatūra orkaitėje pasiekia reikiamą vertę. Baigus sterilizuoti, orkaitė išjungiama, prietaisas atšaldomas iki 50 °C, po to iš jo išimami sterilizuoti daiktai.

Oro sterilizatoriuje esantys gaminiai gali būti sterilizuojami be pakuotės, tačiau tik tuo atveju, jei jie naudojami iškart po sterilizacijos. Maišų popierius, pagamintas pagal GOST 2228-81, gali būti naudojamas kaip pakuotė, jame galima laikyti mažiausiai 3 dienas.

Oro sterilizavimo režimą vaizduoja dvi temperatūros reikšmės - 160 °C 2,5 valandos arba 180 °C 1 valandą.

Sterilizavimas tekančiomis garais

Šio tipo sterilizavimas atliekamas Koch aparate arba autoklave, kai dangtis atsuktas ir išleidimo vožtuvas atidarytas. Kocho aparatas yra metalinis tuščiaviduris cilindras su dvigubu dugnu. Sterilizuojama medžiaga nėra sandariai įkelta į prietaiso kamerą, kad būtų užtikrintas maksimalus kontaktas su garais. Pradinis vandens pašildymas prietaise įvyksta per 10-15 minučių.

Tekantys garai naudojami aukštesnėje nei 100 °C temperatūroje suyrančioms ar gendančioms medžiagoms sterilizuoti – maistinėms terpėms su angliavandeniais, vitaminais, angliavandenių tirpalais ir kt.

Sterilizacija tekančiais garais atliekama frakciniu būdu - ne aukštesnėje kaip 100 oC temperatūroje 20-30 minučių 3 paras. Tokiu atveju vegetatyvinės bakterijų formos žūva, o sporos išlieka gyvybingos ir sudygsta per 24 valandas kambario temperatūroje. Vėlesnis kaitinimas užtikrina šių vegetatyvinių ląstelių, atsirandančių iš sporų, mirtį tarp sterilizacijos etapų.

Tindalizacija– frakcinio sterilizavimo būdas, kai sterilizuota medžiaga kaitinama 56-58 oC temperatūroje valandą 5-6 dienas iš eilės.

Pasterizavimas– vienkartinis medžiagos kaitinimas iki 50-65 °C (15-30 min.), 70-80 °C (5-10 min.). Naudojamas nesporinėms mikrobų formoms naikinti maisto produktuose (piene, sultyse, vyne, aluje).

Ankstesnis1234567891011121314Kitas