Структура бактериологической лаборатории. Микробиология с техникой микробиологических исследований - бактериологическая лаборатория, ее устройство и назначение. Правила работы с микроскопом

Оборудование для клинической микробиологии

Современное оборудование для автоматизации всех этапов микробиологического процесса в лаборатории микробиологии позволяет быстро идентифицировать микроорганизмы и определить их чувствительность к антимикробным средствам для назначения ранней адекватной терапии.

Автоматизация лаборатории микробиологии обеспечивает:

  • Сокращение времени получения результата до 24-72 часов
  • Уменьшение количества ошибок
  • Эффективное снижение трудозатрат
  • Увеличение производительности
  • Повышение эффективности лечения пациента
  • Снижение средней продолжительности койко-дня
  • Возможность анализа ситуации в режиме реального времени
  • Стандартизация чтения результ атов
  • Создание базы данных

Полностью автоматизированная бактериологическая лаборатория BioMerieux


Микробиологическое оборудование Биовитрум

Компания Биовитрум является одним из лидеров по производству и поставкам специального микробиологического оборудования в России. Мы производим и продаем оборудование для микробиологических исследований разработанного по самым инновационным технологиям.

Оснащение микробиологической лаборатории должно в полной мере соответствовать современным нормам качества, технологичности и безопасности и помогать исследователю максимально эффективно решать поставленные задачи. Наряду со специализированными приборами и устройствами в лаборатории микробиологии должно присутствовать и общелабораторное оборудование , позволяющее улучшить качество и производительность труда лаборанта.

Современное общелабораторное оборудование,необходимое для работы микробиологической лаборатории

Работа микробиолога осуществляется в условиях строгой стерильности, позволяющей избежать микробной контаминации и диагностических ошибок. Поддерживать стерильные условия и защитить персонал лаборатории и объекты в исследуемой культуре от микробного обсеменения помогают Этот вид является неотъемлемым элементом оснащения микробиологической лаборатории, обеспечивающим сверхчистые условия работы. Одним из обязательных приборов в микробиологической лаборатории является , служащая для разделения растворов и жидких смесей на различные по плотности фракции. К лабораторному оборудованию общего назначения относятся также для хранения реагентов и поддержания рабочих температур. Использование низкотемпературных холодильников позволяет замораживать и безопасно хранить биологические образцы при температуре до -150°.

Аналитическое и вспомогательное общелабораторное оборудование

Расширить функциональные возможности микробиологической лаборатории позволяет использование аналитического общелабораторного оборудования . Качественно и количественно охарактеризовать состав исследуемых образцов можно с помощью в, повышающих производительность и удобство работы при рутинных исследованиях.


проводящей работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности

Таблица 1


1
2
3

1.

не менее 12

2.
Посевная

3.
Помещение для исследований на кишечную группу инфекций
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

4.
Помещение для фаготипирования
не менее 12

5.
Помещения для проведения исследований по санитарной бактериологии:

1)
для врачей
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

2)
для лаборантов
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

3)
бокс с предбоксом
не менее 12

6.
Помещение для исследования на капельные инфекции:

1)
для врачей
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

2)
для лаборантов
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

3)
бокс с предбоксом
не менее 12

4)
помещение для серологических исследований
не менее 14

5)
бокс с предбоксом для исследования на стерильность
не менее 12

6)
моечная
не менее 18

7)
препараторская
6 на 1 рабочее место, но не менее 10

8)
стерилизационная
не менее 15 на 2 стерилизационных шкафа, на каждый дополнительный шкаф не менее 5

7.
Термальные комнаты:

1)
для исследования на кишечные инфекции
не менее 6

2)
для исследования по санитарной бактериологии
не менее 6

3)
с температурным режимом плюс 43 0 С
не менее 6

8.
Холодильная камера
не менее 6

9.
Автоклавная для обеззараживания отработанного инфекционного материала и стерилизации сред, посуды

не менее 10 на 1 автоклав,

На каждый дополнительный не менее 5


10.
Помещения для приготовления питательных сред:

1)
средоварочная
не менее 12

2)
бокс с предбоксом для розлива сред
не менее 10

11.
Кладовые:

1)
стерильной лабораторной посуды
не менее 12

2)
не стерильной лабораторной посуды
не менее 12

12.
Санитарный пропускник персонала:

1)
гардероб для верхней одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

2)
душевая на 1 сетку

не менее 1

3)

0,4 на шкаф, но не менее 6

4)
туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

13.
Комната персонала
не менее 8

14.
Регистратура и выдача результатов анализов
не менее 6

1)
помещение для забора проб
не менее 6

15.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

16.
Учебная комната
4 на 1 место, но не менее 30

Примечание: в лабораториях с небольшим объемом работы набор помещений зависит от выполняемой номенклатуры исследований. Допускается размещать в одном помещении: препараторскую и стерилизационную (18 м 2), боксы по санитарной бактериологии и боксы капельных инфекций (6 м 2).

^ Набор помещений и площадей бактериологической лаборатории, проводящей работу с микроорганизмами I-II групп патогенности

Таблица 2


1
2
3

1.
В чистой зоне предусматриваются:

1)
гардероб для верхней одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

2)
гардероб для специальной одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

3)
кабинет заведующего лабораторией
не менее 12

4)
комнаты для административной работы

не менее 12

2.
В условно-чистой зоне предусматриваются:

1)
комната с боксом для приготовления и розлива питательных сред
не менее 12

2)
автоклавная на 1 автоклав

не менее 10, на каждый

Дополнительный – не менее 5

3)
препараторская-стерилизационная
не менее 18

4)
моечная
не менее 18

5)
кладовая
не менее 12

6)
туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

3.
В заразной зоне предусматриваются:

1)
5-6 боксов с предбоксниками
не менее 9

Не менее 3

2)
помещение для экспресс-диагностики
не менее 12

3)
автоклавная на 1 автоклав

не менее 10, на каждый

Примечание: помещения условно-чистой зоны отделены от помещений чистой зоны санитарным пропускником.

^ Набор помещений и площадей вирусологической лаборатории

Таблица 3


1
2
3

1.
Кабинет заведующего лабораторией
не менее 12

2.
Помещения для идентификации респираторных вирусов:

1)
бокс с предбоксом для заражения культуры тканей и эмбрионов
не менее 12

2)
люминесцентная
не менее 10

3.
Помещения для идентификации энтеровирусов:

1)
бокс с предбоксом для заражения культуры тканей
не менее 12

2)
бокс с предбоксом для работы с эталонными штаммами
не менее 12

3)
бокс с предбоксом для санитарной вирусологии
не менее 12

4.
Помещение для приготовления культуры тканей:

1)
бокс с предбоксом
не менее 12

5.
Помещение для иммуноферментного анализа:

1)
бокс с предбоксом

не менее 12

6.
Помещения для проведения полимеразной цепной реакции:

1)
зона подготовки проб
не менее 12

2)
зона приготовления реакционной смеси
не менее 10

3)
зона амплификации и детекции
не менее 10

7.
Автоклавная на 2 автоклава
не менее 15

8.
Моечная
не менее 12

9.
Препараторская-стерилизационная
не менее 6

10.
Кладовая для посуды, реактивов, материалов
не менее 6

11.
Комната для регистрации, приема, сортировки и выдачи результатов анализов
не менее 8

12.
Комната для персонала
не менее 8

13.
Санитарный пропускник для персонала:

1)
гардероб для верхней одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

2)
душевая на 1 сетку
не менее 1

3)
гардероб для специальной одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

14.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

Примечание: работы по заражению культуры тканей, выполнению исследований по санитарной вирусологии и работа с эталонными штаммами допускается проводить в одном боксе с предбоксом при установке отдельных боксов биологической безопасности.

Таблица 4


№ п/п
Наименование помещений
Площадь, м 2

1
2
3

1.
Комната для приема, регистрации и выдачи результатов анализов
6 на 1 рабочее место, но не менее 12

2.
Помещение для гельминтологических исследований
9 на 1 рабочее место, но не менее 12

3.
Помещение серологических исследований
не менее 12

4.
Помещение для экспресс-диагностики
не менее 12

5.
Моечная
не менее 9

6.
Гардероб для специальной одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

7.
Комната персонала
не менее 12

8.
Комната энтомологических исследований
не менее 12

9.
Кладовая
не менее 6

10.
Гардероб для верхней одежды
0,4 на шкаф, но не менее 6

11.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

^ Набор помещений и площадей санитарно-химической лаборатории

и лаборатории по определению остаточных количеств

пестицидов и нитратов

Таблица 5


№ п/п
Наименование помещений
Площадь, м 2

1
2
3

1.
Аналитический зал гигиены труда
не менее 18

2.
Аналитический зал гигиены питания
не менее 18

3.
Аналитический зал коммунальной гигиены

не менее 18

4.
Аналитический зал для определения пестицидов и нитратов
не менее 18

5.
Хроматографическая
не менее 6 на один хроматограф

6.
Атомно-абсорбционная
не менее 10

7.
Помещение для подготовки и озоления проб
не менее 15

8.
Весовая
не менее 4 на 1 весы,

но не менее 6

9.
Моечная-дистилляторная
не менее 10

10.
Кабинет заведующего лабораторией
не менее 12

11.


не менее 4 на

одного человека

12.
Помещения для хранения реактивов
не менее 10

13.
Комната регистрации, приема образцов и выдачи результатов
не менее 6

14.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

^ Набор помещений и площадей лаборатории токсикологии

полимеров и других химических веществ

Таблица 6


1
2
3

1.
Кабинет заведующего
не менее 12

2.
Рабочие кабинеты для специалистов
не менее 4 на

одного человека

3.
Затравочная - ингаляционная
не менее 12

4.
Помещение для патоморфологических и биохимических исследований
не менее 18

5.
Помещение для функциональных (токсикологических) исследований
не менее 18

6.
Помещение для санитарно-химических исследований
не менее 18

7.
Материальная (комната для подготовки проб)
не менее 6

8.
Моечная
не менее 12

9.
Весовая
не менее 4 на 1 весы,

но не менее 6

^ Набор помещений и площадей лаборатории электромагнитных

полей и других физических факторов

Таблица 7


№ п/п
Наименование помещений
Площадь, м 2

1
2
3

1.
Кабинет заведующего
не менее 12

2.
Рабочие кабинеты для специалистов
не менее 4 на

одного человека

3.
Помещение для хранения шумовибрационной аппаратуры
не менее 10

4.
Помещение для хранения, подготовки, ремонта и настройки аппаратуры для измерения электромагнитных полей
не менее 10

5.
Душевая на 1 сетку
не менее 1

6.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

7.
Гардероб для верхней одежды
не менее 4

^ Набор помещений и площадей радиологической лаборатории

Таблица8


1
2
3

1.
Кабинет заведующего
не менее 12

2.
Рабочие кабинеты для специалистов
не менее 4 на

одного человека

3.
Помещение для приемки и первичной обработки проб
не менее 16

4.
Помещение для хранения и озоления проб
не менее 18

5.
Радиохимическая (чистая зона)

6.
Радиохимическая (грязная зона)
не менее 20, но не менее 10 на одно рабочее место

7.
Радиометрическая

не менее 20

8.
Спектрометрическая
не менее 18

9.
Помещение для хранения переносной аппаратуры
не менее 8

10.
Помещение для дезактивации посуды, контейнеров, оборудования, белья и специальной одежды
не менее 20

11.
Гардероб для верхней одежды
не менее 4

12.
Душевая на 1 сетку
не менее 1

13.
Туалет на 1 унитаз
не менее 0,85

_____________________________

Приложение 2

К лабораториям»

Требования к применению защитного костюма

1. В зависимости от характера выполняемой работы пользуются следующими типами защитных костюмов:

1) 1 типа – пижама или комбинезон, медицинские тапочки, медицинская шапочка, большая косынка (капюшон), противочумный халат, респиратор-капюшон положительного давления, ватно-марлевая маска (противопылевой респиратор, фильтрующий или кислородно-изолирующий противогаз), очки, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, сапоги резиновые;

2) 2 типа – пижама или комбинезон, медицинские тапочки, медицинская шапочка, большая косынка (капюшон), противочумный халат, ватно-марлевая маска, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, сапоги резиновые;

3) 3 типа – пижама, медицинская шапочка, большая косынка, противочумный халат, резиновые перчатки, полотенце, носки, тапочки, галоши;

4) 4 типа – пижама, шапочка (малая косынка), противочумный халат (хирургический), носки, тапочки.

2. Комбинезоны и пижамы должны быть из плотной ткани (бязи или полотна), спереди с глухой застежкой на пуговицы.

3. Противочумный халат шьют по типу хирургического, но значительно длиннее (до нижней трети голени), при этом полы его должны глубоко заходить одна на другую; пояс и завязки у ворота должны состоять из двух частей, пришитых каждая к отдельной поле, для завязывания рукавов пришивают одну длинную тесемку.

4. Противочумную косынку изготовляют размером 90х90х125 см.

5. Ватно-марлевую маску изготавливают из куска марли длиной 125 см и шириной 50 см. Кусок марли разрезают по длине 50 см с двух сторон посередине с наружных концов, затем в средней части куска марли в продольном направлении укладывают сплошной ровный пласт ваты длиной 25 см, шириной 17 см. Края куска марли заворачивают внахлест.

6. Очки применяют "летные" с широким, плотно прилегающим краем, изогнутыми стеклами или любой иной конструкции, обеспечивающий их герметичность.

7. Противочумный костюм надевают до входа в помещение, где работают с заразным материалом в следующей последовательности: пижама (комбинезон), носки, тапочки, медицинская шапочка, капюшон (большая косынка), противочумный халат и сапоги. Тесемки у ворота халата и пояс халата завязывают спереди на левой стороне обязательно петлей, после чего закрепляют тесемки на рукавах. Респиратор (маска) должен закрывать рот и нос, верхние тесемки маски завязывают петлей на затылке, нижние на темени, по бокам крыльев носа закладывают ватные тампоны. Очки должны быть хорошо пригнаны и проверены на отсутствие фильтрации воздуха.

8. Для обеззараживания костюма предусматриваются отдельные емкости с дезинфицирующим раствором для обработки: сапог или галош, рук в перчатках в процессе снятия костюма, ватно-марлевых масок, халата, косынки (капюшона), полотенца, перчаток. Очки погружаются в 70° спирт.

9. При обеззараживании автоклавированием, кипячением или в дезинфицирующей камере, костюм складывают соответственно в биксы, двойные мешки.

10. Костюм снимают в следующем порядке, погружая руки в перчатках в дезинфицирующий раствор после снятия каждой части костюма:

1) сапоги или галоши протирают сверху вниз тампонами, обильно смоченными дезинфицирующим раствором, вынимают полотенце;

2) протирают ватным тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором, фартук, при наличии его в костюме, снимают, складывая наружной стороной внутрь;

3) снимают нарукавники и вторую пару перчаток, если они были необходимы при работе;

4) снимают очки, оттягивая их двумя руками вперед, вверх и назад за голову;

5) ватно-марлевую маску развязывают и снимают, не касаясь лица наружной ее стороной;

6) развязывают завязки ворота халата, пояс и опустив верхний край перчаток, развязывают завязки рукавов, снимают халат, заворачивая наружную часть его внутрь;

7) снимают косынку, осторожно собирая все концы ее в одну руку на затылке;

8) снимают перчатки (при подозрении на нарушение целостности перчаток их проверяют в дезинфицирующем растворе, (но не воздухом);

9) снимают сапоги;

10) после снятия защитного костюма руки обрабатывают 70° спиртом, затем тщательно моют с мылом.

_________________________

Приложение 3

К Санитарным правилам «Санитарно-

Эпидемиологические требования

К лабораториям»

^

Министерство здравоохранения Республики Казахстан

РАЗРЕШЕНИЕ

Выдано лаборатории________________________________________________________

(наименование организации)

На проведение ________________________________________________________

(виды работ: диагностическая, экспериментальная, производственная)

С микроорганизмами________________________группы патогенности, включая

(наименование микроорганизмов)

__________________________________________________________________

На основании: ____________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

«____»______________20____года

Действительно в течение ___________________________________лет (год) с момента выдачи

Председатель

Режимной комиссии

_________________________

Приложение 4

К Санитарным правилам «Санитарно-

Эпидемиологические требования

К лабораториям»

^ Классификация микроорганизмов

I-IV групп патогенности

Все микробиологические, биохимические и моле-кулярно-биологические исследования микроорганизмов про-водят в специальных лабораториях, структура и оборудование которых зависят от объектов исследования (бактерий, вирусов, грибов, простейших), а также от их целевой направленности (научные исследования, диагностика заболеваний). Изучение иммунного ответа и серодиагностика заболеваний человека и животных осуществляют в иммунологических и серологичес-ких (serum — сыворотка крови) лабораториях.

Бактериологические, вирусологические, микологические и серологические (иммунологические) лаборатории входят в со-став санитарно-эпидемиологических станций (СЭС), диагнос-тических центров и крупных больниц. В лабораториях СЭС выполняют бактериологические, вирусологические и серологи-ческие анализы материалов, полученных от больных и контак-тировавших с ними лиц, обследуют бактерионосителей и про-водят санитарно-микробиологические исследования воды, воз-духа, почвы, пищевых продуктов и т.д.

В бактериологических и серологических лабораториях боль-ниц и диагностических центров проводят исследования с целью диагностики кишечных, гнойных, респираторных и дру-гих инфекционных заболеваний, осуществляют микробиологи-ческий контроль за стерилизацией и дезинфекцией.

Диагностику особо опасных инфекций (чума, туляремия, сибирская язва и др.) проводят в специальных режимных ла-бораториях, организация и порядок деятельности которых строго регламентированы.

В вирусологических лабораториях диагностируют заболева-ния, вызванные вирусами (грипп, гепатит, полиомиелит и др.), некоторыми бактериями — хламидиями (орнитоз и др.) и риккетсиями (сыпной тиф, Ку-лихорадка и др.). При организации и оборудовании вирусологических лабораторий учитывают спе-цифику работы с вирусами, культурами клеток и куриными эмбрионами, требующую строжайшей асептики.

В микологических лабораториях проводят диагностику за-болеваний, вызываемых патогенными грибами, возбудителями микозов.

Лаборатории обычно размещаются в нескольких помещени-ях, площадь которых определяется объемом работ и целевым назначением.

В каждой лаборатории предусмотрены:

а) боксы для работы с отдельными группами возбудителей;

б) помещения для серологических исследований;

в) помещения для мойки и стерилизации посуды, приготов-
ления питательных сред;

г) виварий с боксами для здоровых и подопытных живот-
ных;

д) регистратура для приема и выдачи анализов.

Наряду с этими помещениями в вирусологических лабора-ториях имеются боксы для специальной обработки исследуе-мого материала и работы с культурами клеток.


Оборудование микробиологических лабораторий

Лаборатории снабжены рядом обязательных приборов и аппаратов.

1. Приборы для микроскопии: биологический иммерсион-ный микроскоп с дополнительными приспособлениями (ос-ветитель, фазово-контрастное устройство, темнопольный кон-денсор и др.), люминесцентный микроскоп.

2. Термостаты и холодильники.

3. Приборы для приготовления питательных сред, растворов и т.д.: аппарат для получения дистиллированной воды (дистил-лятор), технические и аналитические весы, рН-метры, аппара-тура для фильтрования, водяные бани, центрифуги.

4. Набор инструментов для манипуляций с микробами: бак-териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.

5. Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др., аппарат для изготовления ватно-марлевых про-бок.

Крупные диагностические комплексы имеют автоматичес-кие анализаторы и компьютеризированную систему оценки полученной информации.

В лаборатории выделено место для окраски микроскопичес-ких препаратов, где находятся растворы специальных красите-лей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой и емкостью с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми пита-тельными средами, химическими реактивами, диагностически-ми препаратами и другими материалами.

В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки се-рологических реакций. Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей используют следующую аппаратуру.

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоян-ная температура. Оптимальная температура для размножения большинства патогенных микроорганизмов 37 "С. Термостаты бывают воздушными и водяными.

2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорга-низмов в анаэробных условиях.

3. С0 2 -инкубатор. Аппарат для создания постоянной тем-пературы и атмосферы определенного газового состава. Пред-назначен для культивирования микроорганизмов, требователь-ных к газовому составу атмосферы.

4. Холодильники. Используют в микробиологических лабора-ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и прочих биологически актив-ных препаратов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов при температуре ниже О °С применяют низкотем-пературные холодильники, в которых поддерживается темпе-ратура —20 °С или —75 "С.

5. Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганиз-мов, эритроцитов и других клеток, для разделения неоднород-ных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях исполь-зуют центрифуги с различными режимами работы.

6. Сушилъно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред-назначен для суховоздушной стерилизации стеклянной лабо-раторной посуды и других жаростойких материалов.

7. Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для сте-рилизации перегретым водяным паром (под давлением). В ми-кробиологических лабораториях используют автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, пере-носные).

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ, ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ, МИКОЛОГИЧЕСКИЕ, ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРИИ И ИХ ОБОРУДОВАНИЕ. УСТРОЙСТВО СОВРЕМЕННЫХ МИКРОСКОПОВ. МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Программа

1. Правила работы и организация микробиологических (бактериологических, вирусологических, микологи-ческих) лабораторий.

2. Основные приборы и оборудование микробиологичес-кой лаборатории.

3. Микроскопы и микроскопическая техника. Правила работы с иммерсионным микроскопом (объективами).

Демонстрация

1. Устройство и применение основных приборов и обо-рудования, используемого в микробиологических ла-бораториях: термостата, центрифуг, автоклава, су-шильного шкафа, инструментария и посуды.

2. Устройство биологического микроскопа. Различные ме-тоды микроскопии: темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная.

3. Препараты микробов (дрожжей и бактерий) при раз-личных методах микроскопии.

Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать препараты дрожже-подобных грибов рода Candida , используя различные виды микроскопии.

Методические указания

Правила работы в микробиологических лабораториях .

Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний — пато-генными микроорганизмами.

Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутрен-него распорядка:

1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых слу-чаях работающие надевают на лицо маску из марли. Ра-бота с особо опасными микробами регламентируется спе-циальной инструкцией и проводится в режимных лабора-ториях.

2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.

4. При случайном попадании инфицированного мате-риала на стол, пол и другие поверхности это место необ-ходимо тщательно обработать дезинфицирующим раство-ром.

5. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специаль-ной инструкции. Культуры патогенных микробов реги-стрируют в специальном журнале.

6. По окончании работы руки следует тщательно вы-мыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.

Микроскопы и методы микроскопии

Рис. 1.1. Микроскопы.

а — общий вид микроскопа "Биолам"; б — микроскоп МБР-1: 1 — основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты для перемещения предмет-ного столика; 4 — клеммы, прижимающие препарат; 5 — конденсор; 6 — кронштейн конденсора; 7 — винт, укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы кон-денсора; 10 — зеркало; 11 — тубусодержатель; 12 — рукоятка макрометричес-кого винта; 13 — рукоятка микрометрического винта; 14 — револьвер объек-тивов; 15 — объективы; 16 — наклонный тубус; 17 — винт для крепления ту-буса; 18 — окуляр.

Для микробиологических исследований используют не-сколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный) и специальные методы микроскопии (фа-зово-контрастный, темнопольный).

В микробиологической практике применяют микроскопы отечественных марок: МБР-1, МБИ-2, МБИ-3, МБИ-6, "Био-лам" Р-1 и др. (рис. 1.1). Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков различных микробов, величина которых не менее 0,2—0,3 мкм.

Иммерсионная микроскопия

Применяется для увеличения разрешающей способности метода световой микроскопии . Раз-решающая способность системы светооптической микроско-пии определяется длиной волны видимого света и числовой апертурой системы. Числовая апертура показывает величину угла максимального конуса света, попадающего в объектив, и зависит от оптических свойств (преломляющей способности) среды между объектом и линзой объектива. Погружение объ-ектива в среду (минеральное масло, вода), имеющую высокий коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, пре-пятствует рассеянию света от объекта.

Рис. 1.2. Ход лучей в иммерсионной системе, п — показатель преломления.

Рис. 1.3. Ход лучей в темнопольных конденсорах, а — параболоид-конденсор; б — кардиоид-конденсор; 1 — объектив; 2 — иммерсионное масло; 3 — препарат; 4 — зеркальная поверхность; 5 — диа-фрагма.

Таким образом достигается увеличение числовой апертуры и соответственно разре-шающей способности. Для иммерсионной микроскопии при-меняют специальные иммерсионные объективы, снабженные меткой (МИ — масляная иммерсия, ВИ — водная иммерсия). Предельная разрешающая способность иммерсионного микро-скопа не превышает 0,2 мкм. Ход лучей в иммерсионной системе показан на рис. 1.2.

Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, уве-личение микроскопа с иммерсионным объективом 90 и окуля-ром 10 составляет: 90 x 10 = 900.

Микроскопия в проходящем свете (светлопольная микроско-пия) используется для изучения окрашенных объектов в фик-сированных препаратах.

Темнопольная микроскопия . Применяется для прижизненно-го изучения микробов в нативных неокрашенных препаратах. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости (эффект Тиндаля ). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоид-конденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе (рис. 1.3). При этом способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенном поле зрения) видны ярко светя-щиеся частицы. Препарат в этом случае имеет вид, показанный на рис. 1.4, б (на вклейке).

Фазово-контрастная микроскопия . Предназначена для изуче-ния нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособле-ние дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объек-ты. Свет проходит через различные биологические структуры с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое глазом. Фазовое устройство, вклю-чающее особые конденсор и объектив, обеспечивает преобра-зование изменений фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом достигается усиление различия в оптической плотности объектов. Они приобретают высокую контрастность, которая может быть позитивной или негатив-ной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изо-бражение объекта в светлом поле зрения, негативным — свет-лое изображение объекта на темном фоне (см. рис. 1.4; на вклейке).

Для фазово-контрастной микроскопии используют обыч-ный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устрой-ство КФ-1 или КФ-4 (рис. 1.5), а также специальные освети-тели.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно-вана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее под воздействием внешнего излучения: светового, ультрафиолето-вого, ионизирующего и др. Фотолюминесценция — люмине-сценция объекта под влиянием света. Если освещать люминес-цирующий объект синим светом, то он испускает лучи крас-ного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта.

Рис. 1.5. Фазово-контрастное устройство, а — фазовые объективы; б — вспомогательный микроскоп; в — фазовый кон-денсор.

Длина волны излучаемого света (цвет люминесценции) зависит от физико-хими-ческой структуры люминесцирующего вещества.

Первичная люминесценция биологических объектов (собст-венная, или биолюминесценция) наблюдается без предвари-тельного окрашивания за счет наличия собственных люминес-цирующих веществ, вторичная (наведенная) — возникает в ре-зультате окрашивания препаратов специальными люминесци-рующими красителями — флюорохромами (акридиновый оран-жевый, ауромин, корифосфин и др.). Люминесцентная микро-скопия по сравнению с обычными методами обладает рядом преимуществ: возможностью исследовать живые микробы и обнаруживать их в исследуемом материале в небольших кон-центрациях вследствие высокой степени контрастности.

В лабораторной практике люминесцентную микроскопию широко применяют для выявления и изучения многих микро-бов.

Электронная микроскопия . Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способнос-ти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяют для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других суб-микроскопических объектов. Световые лучи в таких микроско-пах заменяет поток электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около 0,005 нм, т.е. почти в 100 000 раз меньше длины волны видимого света. Высокая разре-шающая способность электронного микроскопа, достигаю-щая 0,1-0,2 нм, позволяет получить общее полезное увеличе-ние до 1 000 000.

Наряду с приборами "просвечивающего" типа используют сканирующие электронные микроскопы, обеспечивающие рель-ефное изображение поверхности объекта. Разрешающая спо-собность этих приборов значительно ниже, чем у электронных микроскопов "просвечивающего" типа.

Правила работы с микроскопом

Работа с любым световым микроскопом включает установку правильного освещения по-ля зрения и препарата и его микроскопию различными объек-тивами. Освещение может быть естественным (дневным) или искусственным, для чего используют специальные источники света — осветители разных марок.

При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго придерживаться определенного порядка:

1) на приготовленный на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;

2) повернуть револьвер до отметки иммерсионного объек-тива 90х или 10Ох;

3) осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;

4) установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;

5) провести окончательную фокусировку препарата микро- метрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с пре-
паратом, так как это может повлечь поломку покровного стек-ла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1—1 мм).

По окончании работы микроскопа необходимо удалить мас-ло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив 8х.

Для темнопольной и фазово-контрастной микроскопии ис-пользуют нативные препараты ("раздавленная" капля и др., см. тему 2.1); микроскопируют с объективом 40х или специальным иммерсионным объективом с ирис-диафрагмой, позволяющей регулировать численную апертуру от 1,25 до 0,85. Толщина предметных стекол не должна превышать 1 — 1,5 мм, покров-ных — 0,15—0,2 мм.

Для проведения микробиологических
исследований при больницах и поликлиниках или
самостоятельно от них существуют
бактериологические лаборатории.
В них поступает для исследования различный
материал, полученный от больных людей
(мокрота, моча, гной, кал, кровь, спинномозговая
жидкость и пр.).
Кроме того, существуют еще санитарнобактериологические лаборатории, в которых
бактериологическому контролю подвергается вода,
воздух и пищевые продукты.
2

Объектами исследования в бактериологических лабо­раториях являются:

Объектами исследования в
бактериологических лабораториях являются:
1. Выделения из организма: моча, кал, мокрота, гной, а
также кровь, патологический и трупный материал.
2. Объекты внешней среды: вода, воздух, почва, смывы
с предметов инвентаря, корма, технологическое сырьё
получаемое от убоя сельскохозяйственных животных.
3. Продукты питания, образцы мяса и мясопродуктов,
молока и молокопродуктов, которым необходимо дать
оценку на пригодность для пищевых целей.
3

предназначена

Бактериологическая лаборатория
предназначена
– для исследования материалов, содержащих
возбудителей бактериальных инфекций,
– для определения санитарномикробиологических показателей,
– контроля состояния и напряженности
специфического иммунитета и других
микробиологических исследований.
4

Бактериологическая лаборатория

Специфика микробиологических работ требует, чтобы помещение, отведенное под лабораторию, было изолировано:
– от жилых комнат,
– пищевых блоков и
– других непрофильных производственных помещений.
Бактериологическая лаборатория должна размещаться в
изолированных от других лабораторий помещениях с
необходимым оборудованием и мебелью.
Лаборатория должна иметь:
– отдельный вход,
– гардероб и
– душевую.
5

Бактериологическая лаборатория

В состав бактериологической лаборатории входят:
– комната приема и регистрации материалов;
– лабораторные комнаты для бактериологических
исследований и подсобные помещения;
– автоклавная или стерилизационная («чистая» ,
«грязная») для обеззараживания отработанного
материала и зараженной посуды;
– моечная, оборудованная для мытья посуды;
– бактериологическая кухня – для приготовления,
разлива, стерилизации и хранения питательных сред;
– виварий для содержания подопытных животных;
– материальная для хранения запасных реактивов,
посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.
6

Бактериологическая лаборатория

Перечисленные подсобные помещения как
самостоятельные структурные единицы входят
в состав крупных бактериологических
лабораторий.
В небольших лабораториях
бактериологическую кухню и
стерилизационную объединяют в одной
комнате;
– специальное помещение для содержания
подопытных животных отсутствует.
7

Бактериологическая лаборатория

Помещения микробиологических
лабораторий по степени опасности для
персонала разделяются на 2 зоны:
I. "Заразная" зона - помещение или группа
помещений лаборатории, где осуществляются
манипуляции с патогенными биологическими
агентами и их хранение, персонал одет в
соответствующий тип защитной одежды.
II. "Чистая" зона - помещения, где не проводят
работу с биологическим материалом, персонал одет
в личную одежду.
8

Лабораторные комнаты

Под лабораторные комнаты, в которых производят
все бактериологические исследования, отводят
наиболее светлые, просторные помещения.
Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола
окрашивают в светлые тона масляной краской или
покрывают кафелем.
Пол застилают релином или линолеумом.
Такого рода отделка позволяет пользоваться при уборке
помещения дезинфицирующими растворами.
В каждой комнате должна быть раковина с водопроводной подводкой и емкости с дезинфицирующим
раствором.
9

10. Бактериологическая лаборатория

В число обязательных помещений входят:
Лаборатории кишечных инфекций
Лаборатории капельных инфекций
Санитарно-бактериологическая лаборатория
Серологическая лаборатория
Вспомогательные помещения:
Средоварня,
Моечная
Стерилизационная
Регистратура
Кладовые
Санузел для сотрудников
Виварий
Каждую лабораторию обязательно оснащают микроскопом,
автоклавом, термостатами, сушильными и стерилизационными
шкафами, аппаратом для свертывания крови, центрифугами,
лабораторными весами, рН-метром, моечной ванной
10

11. Бактериологическая лаборатория

В одной из комнат оборудуют застекленный бокс изолированное помещение с тамбуром (предбоксником) для
выполнения работ в асептических условиях.
В боксе ставят стол для посевов, табурет, над рабочим местом
монтируют бактерицидные лампы.
В предбокснике помещают шкаф для хранения стерильного
материала.
Окна и двери помещений "заразной" зоны должны быть
герметичными.
Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны должна
быть изолирована от других вентиляционных систем и
оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха.
11

12. Комнаты для микробиологических исследований

Комнаты для микробиологических
исследований оборудуют:
термостатами,
холодильниками,
центрифугами,
весами,
водяными банями,
электромагнитными мешалками.
На столах размещают необходимую
аппаратуру.
Работу с инфицированным материалом
проводят в боксе с предбоксником.
12

13. Бактериологическая лаборатория

В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют
мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на
питательные среды.
Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают
необходимые для работы инструменты: штативы для пробирок,
пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные
пипетки, ступки, емкости с дезрастворами для использованной
посуды и т. д.
В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные
халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть
сменная обувь.
В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники,
центрифуги и другое оборудование.
В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную
уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью
бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом
работы и после работы.
13

14. Автоклавная

В автоклавной необходимо иметь два
автоклава:
один автоклав для чистых материалов (для
стерилизации посуды, питательных сред,
инструментов);
другой автоклав для инфицированных материалов
(для обезвреживания инфицированных
инструментов и материалов).
14

15. Моечная

Моечная предназначена для мытья и
обработки посуды.
Моечная должна иметь раковину с
холодной и горячей водой и плиту.
Моечная должна быть оснащена
средствами и приспособлениями для мытья
посуды
В моечной размещают сушильные шкафы.
15

16. Виварий

Виварием называется помещение, используемое
для содержания лабораторных животных.
В виварии необходимо иметь:
карантинное отделение,
комнаты для экспериментальных и здоровых животных,
помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и
спецодежды,
кухню для приготовления корма,
кладовую,
фуражную,
трупосжигательную печь.
Все помещения вивария должны быть
изолированы друг от друга.
16

17.

В бактериологической лаборатории
помещения располагают так, чтобы
«грязный» и «чистый» потоки не
перекрещивались и не соприкасались
17

18. Правила работы в бактериологической лаборатории

Сотрудники лаборатории обязаны соблюдать следующие
правила:
1. Работать разрешается в специальной одежде – халате и шапочке. В боксе
работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают
резиновые перчатки и очки.
Обязательно меняют обувь!
2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать
верхнюю одежду на халат.
3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
4. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен
рассматриваться как инфицированный.
Поэтому при распаковке материала необходимо соблюдать осторожность.
Емкости следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить
их на подносы или в кюветы.
18

19. (продолжение)

5. В случае попадания инфицированного материала на халат, руки, стол, обувь необходимо
провести дезинфекцию и сообщить об этом заведующему лабораторией.
6. Зараженный материал обязательно уничтожают автоклавированием. Инструменты, а
также поверхность рабочего стола после работы дезинфицируют.
7. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы без
предварительной их дезинфекции.
8. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении,
обеззараживают, погружая в дезраствор.
9. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют.
Культуры микроорганизмов, необходимые для дальнейшей работы, убирают на хранение в
холодильник.
10. В рабочую зону допускаются только лица, предупрежденные о потенциальной
опасности и выполнившие специальные требования (например, иммунизация, спецодежда
и т.д.)
19

20. В бактериологической лаборатории ведется следующая документация:

1. Инвентарная книга музейных штаммов культур.
2. Журнал учета движения материала в лаборатории.
3. Журнал учета стерилизации и уничтожения
инфицированного материала.
4. Журнал учета зараженных подопытных животных.
5. Журнал исследований (экспертиз).

ИНСТРУКЦИЯ К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ №1

ТЕМА: «Виды микробиологических лабораторий. Устройство и оборудование бактериологической лаборатории. Правила работы в лаборатории.

Задачи:

· Изучить виды микробиологических лабораторий

· Изучить устройство и оборудование бактериологической лаборатории

· Изучить правила работы в бактериологической лаборатории

· Изучить виды патологического материала и правила его доставки в лабораторию

· Повторить учебную информацию о микробиологических методах исследования

ЗАДАНИЕ № 1

Изучите виды микробиологических лабораторий.

Бактериологические лаборатории организуются в инфекционных больницах, клиниках, санитарно-эпидемиологических станциях. Задача медицинской бактериологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. В бактериологическую лабораторию медицинский персонал приносит правильно взятый у больного или обследуемого патологический материал /мокроту, мочу, рвотные массы, мазок из зева, кровь, спинномозговую жидкость, желчь, промывные воды бронхов и т.д./, его исследуют и определяют, какой возбудитель находится в патологическом материале, т.е. проводят выделение возбудителя. Кроме этого в серологических лабораториях определяют ответ организма на внедрение микроорганизмов /проводится серологическая диагностика инфекционных заболеваний/. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления микробного загрязнения внешней среды

/ воды, почвы, воздуха/ и различных объектов внешней среды.

По своему назначению различают бактериологические, вирусологические, иммунологические и специально предназначенные для диагностики особо опасных инфекций лаборатории.

Заполните таблицу в тетради

ЗАДАНИЕ № 2

Изучите устройство микробиологической лаборатории.

Микробиологическая лаборатория обязательно размещается в изолированном помещении. В лаборатории должно быть несколько помещений.

Лаборатория оборудуется приточно-вытяжной вентиляцией и противопожарными устройствами.

Помещения лабораторий должны быть удобными для влажной уборки и дезинфекции, в частности, панели окрашиваются светлой масляной краской, полы покрываются линолеумом, а столы – специальной эмалью.

Основным оборудованием лаборатории являются микроскопы, термостаты, холодильники, аппараты для стерилизации (автоклав, сухожаровой шкаф, свертыватель), центрифуга и дистиллированный аппарат.

В вирусологических лабораториях создают боксы с предбоксниками. Кроме обычного оборудования их оснащают ультратермостатом, центрифугой с охлаждением для очистки и концентрации вирусов, холодильником для их хранения при температуре - 20º -70ºС, аппаратом для вакуумного высушивания материалов.

Иммунологические лаборатории оснащают посудой, приборами, реактивами, диагностикумами и аллергенами для серологических реакций.

Персонал микробиологических лабораторий обеспечивают халатами, косынками и шапочками, марлевыми масками, клеенчатыми передниками, нарукавниками, резиновыми перчатками, противочумными костюмами для индивидуальной защиты. В процессе микробиологических исследований необходимо соблюдать строгий санитарно-противоэпидемический режим, исключающий внутрилабораторное заражение. При случайном попадании исследуемого материала или культуры микроорганизмов на руки, стол, халат или обувь следует немедленно провести их дезинфекцию.

После окончания работы питательные среды с посевами ставят в термостат, музейные культуры – в сейфы-холодильники. Столы протирают дезинфицирующим раствором и тщательно моют руки.

После вскрытия инфицированных животных инструменты и шприцы подвергаются стерилизации, отработанные материалы и трупы сжигают или автоклавируют.

Основные помещения лаборатории:

1. Лабораторные комнаты – предназначены для проведения микробиологических исследований. Это светлая комната, окрашенная масляной краской. В ней размещены рабочие столы, холодильник /в нем держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и др./.

2. Термостатная комната. В ней находятся термостаты /аппараты, в которых выращивают микроорганизмы, температура в них должна быть 37 0 С, она ежедневно регистрируется, центрифуги /используются для отделения плотных частиц от жидкости/.

3. Материальная комната в ней находятся шкафы /в них держат штативы, сухие питательные среды, реактивы, приборы/ и др.

Около раковины должен находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

4. Помещение для приготовления питательных сред – в нем приготавливают питательные среды.

5. Моечная – комната для мытья и обработки посуды.

6. Стерилизационная – в ней находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательные среды, автоклавы, сушильный шкаф.

7. Бокс – строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеззараживание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. В бокс подается обеззараженный воздух. В бокс входят через предбоксник, в котором переодеваются: надевают халат, тапочки, шапочку, маску и переходят в бокс через вторую дверь. В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

8. Регистратура – в ней регистрируют поступивший патологический материал и результат исследования.

9. Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных.